请问：做荧光定量PCR时，△△Ct值是什么意思，它的计算公式是什么？ 荧光定量pcr扩增管 薄壁

请问：做荧光定量PCR时，△△Ct值是什么意思，它的计算公式是什么？ Ct是荧光定量计算公式的简化形式，用于比较不同样品之间的差别或变化比率。Ct=-1/lg(1+Ex)*lgX€+lgN/lg(1+Ex)，其中，n为扩增反应的循环次数，X€为初始模板量，Ex为扩增效率，N为荧光扩增信号达到阈值强度时扩增产物的量。Ct(n)=Ct（目的基因）-Ct（内参基因）；CT(n)=△Ct(n)-△Ct(1)。起始拷贝数越多，Ct值越小。利用已知起始拷贝数的标准品可作出标准曲线，其中横坐标代表起始拷贝数的对数，纵坐标代Ct值。因此，只要获得未知样品的Ct值，即可从标准曲线上计算出该样品的起始拷贝数。扩展资料荧光定量PCR的原理：荧光定量PCR技术：在PCR反应体系中加入荧光基团，通过荧光信号不断累积而实现实时监测PCR全程，然后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。在实时荧光定量PCR中，对全程PCR扩增过程进行实时检测，根据反应时间和荧光信号的变化可以绘制成一条曲线。实时荧光定量常用的荧光化学分类有SYBR Green I法和Tag Man探针法。Ct值：C代表Cycle，t代表threshold，Ct值的含义是每个反应管内的荧光信号到达设定的域值时所经历的循环数。参考资料来源：参考资料来源：做荧光定量PCR时，△△Ct值是什么意思，它的计算公式是什么 △Ct=△Ct(试验样品)—△Ct(基准样品)Ct(试验样品)=Ct（试验样品，目的基因）—Ct（试验样品，内参基因）Ct(基准样品)=Ct（基准样品，目的基因）—Ct（基准样品，内参基因）2－△Ct=2－（－1.2）=2.30在荧光定量PCR中，为什么通常把前15个循环作为荧光本底信号？荧光背景值是哪儿来的？ 我们一般把荧光PCR的前15个循环信号作为荧光本底信号（baseline，基线期），即样本的荧光背景值和阴性对照的荧光值，扩增的荧光信号被荧光背景信号所掩盖。荧光阈值是在荧光扩增曲线上人为设定的一个值，它可以设定在荧光信号指数扩增阶段任意位置上，荧光域值的缺省设置是3～15个循环的荧光信号的标准偏差的10倍（机器自动设置）。我们在做荧光定量PCR实验时，经常采用手动设置，手动设置的原则要大于样本的荧光背景值和阴性对照的荧光最高值，同时要尽量选择进入指数期的最初阶段，真正的信号是荧光信号超过域值。请问做荧光定量PCR，PCR管盖上是不是不能写字，而只能写在管壁上？据说这样会影响荧光采集？是否有依据？ 根据你机器的型号。大多是都是从顶部读取数据的。所以不要在管盖上标记。最好是用96孔板做PCR。然后用封膜。这样信号损失要小一些。标记也方便，只要其他地方记下位置就可以了。请问：做荧光定量PCR时，△△Ct值是什么意思，它的计算公式是什么？ Ct这是相对荧光定量的一个计算公式的简化形式，用于比较不同样品之间的差别或变化比率。Ct=-k lgX0+b（线性方程）用这个方程可以通过Ct值算出样品的起始浓度斜率=-1/lg(1+e。恒温PCR和实时荧光定量PCR这两种有什么区别？哪个更有优势？ 实时荧光2113定量PCR技术，是指在PCR反应体系中加入荧光基5261团，利用荧光信4102号积累实时监测整个PCR进程，最1653后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。PCR(聚合酶链式反应）是利用DNA在体外摄氏95°高温时变性会变成单链，低温（经常是60°C左右）时引物与单链按碱基互补配对的原则结合，再调温度至DNA聚合酶最适反应温度（72°C左右），DNA聚合酶沿着磷酸到五碳糖(5'-3')的方向合成互补链。恒温PCR和实时荧光定量PCR的不同，是不同在实时荧光定量PCR的系统中加入了荧光染料（SYBR Green 或Taqman 探针等等）。以SYBR Green为例，这种染料可以结合在双链的DNA上，当PCR不断进行时，每一次退火生成的双链DNA也在增加，荧光染料结合也越多，荧光也越强。在机器中有一个探测荧光的探头，可以定量检测荧光的强度，转换成数值。这样就可以实时记录反映体系中DNA的反应情况。荧光PCR更有优势，因为荧光PCR灵敏度高于恒温PCR，同样价格也高一些。荧光定量PCR的扩增产物长度为什么不能太长？ Taqman探针为基础的Real-time PCR以引物和探针序列决定反应的特异性，而通过荧光强度判断探针降解程度，从而推断模板量.传统PCR通过琼脂糖凝胶电泳判断产物量，达到半定量的目的.由于EB等染色剂与较长片段DNA结合后才能显现可测量的荧光，因而往往产物大小为150-1000 bp.Real-time PCR通过反应中得到的荧光强度/循环数的比例关系得出结果，因而不需要加长产物.产物长度短还能够简化热循环反应条件，减少反应时间.当然在条件允许的情况下，尽量增长产物长度实时荧光定量PCR扩增仪的荧光检测系统主要由哪两个部分组成？ 参考答案：实时荧光定量PCR扩增仪的荧光检测系统主要包括激发光源和检测器。（1）激发光源一般为卤钨灯光源或发光二极管光源。（2）检测器常用的是超低温CCD成像系统和光电。

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