qRT-PCR中标准曲线制作及浓度梯度问题要做qRT-PCR，但是不太清楚，1：浓度梯度是用来制作标准曲线的吗？2：是不是内参和每个目的基因都要制作各自的标准曲线？也就是说如果我要作10个基因的话，就要制作内参加目的基因共11个标准曲线？3：怎么确定最适合的cDNA模板浓度呢？4：有说作3个生物学重复，我是小白，请大家不吝赐教啊
关于实时荧光PCR检测2-△△Ct计算结果？ 关于实时荧光PCR检测2-△Ct计算结果？实验组和对照组，将内参基因和目的基因各做三个重复。内参基因的Ct值得到三个数据，取平均值。将目的基因的三个Ct值与Ct-actin相减，。
目的基因的Ct值小于内参基因，这个内参基因还能用吗 如何通过bai荧光定量目的基du因和GAPDH计算相对表达量内参zhi就是一dao个表达量在各个组基本保内持不变容的基因，又叫看家基因，比如常用的GAPDH，actin。或者18s rRNA也可以。如果内参表达量一致，说明你PCR的上样量一致，样本的质量也一致。如果出入很大，说明你的样本的浓度或者是质量有问题。测到的目的基因的表达量就不可靠了管家基因是用来定量的。用来计算相对表达量。管家基因在相同量样品中的表达量我们认为是一致的。然后根据这个量来计算你的基因在不同样品中的表达量。所以每一个都需要单独的样品。基因组干扰需要你在提取RNA以后用DNase处理样品。如果不放心，可以拿处理过的RNA做膜版，跑一次，如果有带就是有污染，如果没有可以合成cDNA库了。
