检测t,b淋巴细胞功能的实验主要有哪些 工具/原料 工具/原料 RPMI1640 培养液 Hank's 液 刀豆蛋白A(Concanvalin A,ConA),用RPMI1640 液配成1mg/ml,分装小瓶,冷冻保存 MTT 1mg/ml 2.5%碘酒、75%酒精 方法/。
细胞增殖实验(MTT法),MTT分析法以活细胞代谢物还原剂3-4,5-dimethylthiahiazo-z-y1-3,5-di-heytetrazoliumromide,MTT(噻唑蓝)为基础。MTT为黄色化合物,是一种接受氢。
淋巴母细胞转化实验有哪些不同的检测方法 工具/原料RPMI1640 培养液Hank's 液刀豆蛋白A(Concanvalin A,ConA),用RPMI1640 液配成1mg/ml,分装小瓶,冷冻保存MTT 1mg/ml2.5%碘酒、75%酒精方法/步骤小鼠脾细胞悬液的制备:取一个灭菌的平皿,加入5ml Hank's液。颈椎脱臼法处死小鼠,取脾脏,放入平皿中,在钢网上研磨并过筛,制成细胞悬液。取出100μl用于计数。将其余细胞悬液移入一离心管中,离心1500rpm,7min,(或1000rpm,10min)弃去上清,用RPMI1640 培养液稀释,制成2.5×106/ml的脾细胞悬液,然后加入ConA使每孔最终浓度为2μg/ml,同时做不加ConA的阴性对照孔。将上述细胞悬液加入96 孔平底培养板中,每孔0.1ml。将培养板放入含有5%CO2的37℃培养箱中培养48-72 小时,在培养结束前4-6 小时,于培养板各孔内加入1mg/mlMTT液,10μl/孔。37℃培养6 小时。各孔内加入0.01M 盐酸—异丙醇110μl,30 分钟内(或加2%SDS 100ul/孔,过夜)用酶标测定仪测OD 值,测定波长570nm。实验结果将实验组和对照组三个复孔的OD 值平均。转化值=实验组的平均OD 值-对照组的平均OD 值。END注意事项由于本实验需要培养3 天,才能观察结果。因此,在操作时应注意无菌操作,避免细菌污染,导致实验的失败。。