持家基因跑不出来,但目的基因可以跑出来浅条带为什么? 看家基因和目的基因

western blot内参和marker的区别 看到你的目的蛋白条带在30和35kD之间，就可以初步断定是你的目的蛋白。2.内参呢，内参也叫看家基因，在组织或细胞中都会表达，且表达量在不同组织或细胞中几乎是相同的，。双标准曲线是什么意思 所谓相对定量是指在测定目的基因的同时测定某一内源性管家基因，该管家基因的作用有（1）用于核苷酸的拷贝数的比较；（2）作为内源性对照补偿待测样本的体积变异、核酸抽提过程中造成的目的基因变异，以及反映反应体系内是否存在PCR扩增的影响因素；（3）标准化标本。由于管家基因在各种组织中是恒定表达的，所以可以以管家基因的定量来作为某种标准以比较样本来源不同的目的基因表达量的差异。通常选用的管家基因有GAPDH、β-actin、β2-微球蛋白和rRNA，研究者也可以根据具体的需要而选定合适的管家基因。使用的相对定量较为早期的方法是用一系列已知外参物做标准曲线，根据该标准曲线得到目的基因和管家基因的量，再将目的基因的同管家基因的比值作为定量的最后结果。这一方法要求外参、目的基因和管家基因的扩增效率一致。标准曲线方法使用标准 RNA 样品，标准曲线通过梯度稀释制备，用来对目的基因和看家基因进行分析，结果数据被用来生成标准曲线和线性方程。看家基因的标准曲线由其 C t 值对 RNA 的量做图（Figure 2A）。而目的基因的标准曲线由其 C t 值对任意的表达倍数做图。要计算未知样品的相对表达量，首先通过看家基因的标准曲线求出总 RNA 量。然后目的基因的 。内参的表达量与目的基因的表达量有关吗 没有关系，内参的表达量理论上来说是比较恒定的，一般为看家基因。目的基因的表达则不是那么恒定。如果内参基因对目的基因的有一定的调控作用就另说了目的基因的Ct值小于内参基因，这个内参基因还能用吗 如何通过荧光定量目的基因和GAPDH计算相对表达量内参就是一个表达量在各个组基本保持不变的基因，又叫看家基因，比如常用的GAPDH，actin。或者18s rRNA也可以。如果内参。有两个内参基因时，目的基因的ct值怎么算 如何通过荧光定量目的基因和GAPDH计算相对表达量内参就是一个表达量在各个组基本保持不变的基因，又叫看家基因，比如常用的GAPDH，actin。或者18s rRNA也可以。如果内参表达量一致，说明你PCR的上样量一致，样本的质量也一致。如果出入很大，说明你的样本的浓度或者是质量有问题。测到的目的基因的表达量就不可靠了管家基因是用来定量的。用来计算相对表达量。管家基因在相同量样品中的表达量我们认为是一致的。然后根据这个量来计算你的基因在不同样品中的表达量。所以每一个都需要单独的样品。基因组干扰需要你在提取RNA以后用DNase处理样品。如果不放心，可以拿处理过的RNA做膜版，跑一次，如果有带就是有污染，如果没有可以合成cDNA库了。持家基因跑不出来，但目的基因可以跑出来浅条带为什么？ 持家基因没有扩出来呗。PCR为阴性结果不是什么罕见的事情，任何试剂出问题，任何操作有错误都会导致PCR扩不出来。看家基因作用是什么？实时荧光定量PCR技术中为什么要用它？ 看家基因的意思是稳定表达的一种基因所以他的作用就是用来做内参比如在做PCR的时候，初始的模板量的不同直接导致扩增后的量的差别，那么看家基因的作用就出现了，要在看家基因的表达水平相同的情况下，比较其他基因的表达是否有升高或降低。荧光定量PCR的内参和目的基因一定要放一起吗 荧光定量PCR的内参和目的基因一定要放一起内参就是一个表达量在各个组基本保持不变的基因，又叫看家基因，比如常用的GAPDH，actin。或者18s rRNA也可以。如果内参表达量一致，说明你PCR的上样量一致，样本的质量也一致。如果出入很大，说明你的样本的浓度或者是质量有问题。测到的目的基因的表达量就不可靠了什么事管家基因？怎么用？内参基因又是怎么回事？ 内参基因 内参即是内部参照，它们在各组织和细胞中的表达相对恒定，在检测基因的表达水平变化时常用它来做参照物。其作用是校正上样量、上样过程中存在的实验误差，保证。

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