pcr 产物测序后双峰，我该怎么办 可能有三种原因：一，pcr产物不纯，电泳条带单一并不一定就说明没有非特异性扩增，也可能非特异性扩增产物与目标产物size相近，或浓度很低。解决办法是提高退火温度做pcr，。
PCR产物直接测序的原理 原理：是来至于双脱氧链终止法—现在应用最多的核酸测序技术，由Sanger等1977年提出：模板经过测序PCR反应后形成3'末端带有荧光标记（早期用同位素标记）的相差一个碱基的不同长度的产物，再根据每段DNA产物的电泳速度来检测整段DNA的序列.以上—手打—希望对你有帮助优点：一是操作易于标准化与自动化，因为它是一个单一的酶的反应过程，不依赖于生物体；二是通过一次测序反应就能确定样品中某个等位基因的顺序，而PCR产物克隆后测序时，样品顺序要在测定了数个克隆片段之后才能确定.因为只有这样，才能区别突变是基因组本来就有的，还是由于Tag聚合酶在PCR过程中错误掺入核苷酸引起的.
PCR产物测序问题。 PCR 产物测序的最大风险是有在凝胶上看起来的一个条带，实际上有多个分子。也就是说长度相似的分子有可能在电泳的时候只有一条带。如果只是进行PCR产物回收，没有进行凝胶分离的过程的话，东西可能更多了。问题就在于，如果出现双峰或者多峰，这个样品就白送了，什么也结果也没有。特别你现在用的还是简并引物，本身目标就是为了能扩增出目标片段来，比较建议先做TA克隆，然后测序的时候，最好挑几个克隆去测，不要只送一个克隆。现在测序也不贵，这样一次测上几个克隆，也可以确认在扩增出来的片段中，是否只有一个分子，还是其实有多个不同序列的片段。另外，长度选择的问题，既然设计了简并引物，就是要钓取目前序列还未知的基因，可以选择从长片段开始测序，根据这个结果再考虑短的片段是否需要再继续测序。只有拿到目标序列了，才能决定下一步采用什么方式来获得全长的基因片段。
