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pcr循环数对跑胶的影响 一般PCR产物浓度能达到多少ng每微升

2021-04-05知识1

一般PCR产物浓度能达到多少ng每微升 PCR产物浓度主要取决于模版的量和引物的量.如果模版属于稀有基因,那么产物浓度就不会高.而且你不要回收后才测浓度,PCR结束后就可以跑电泳或者测OD值都很快的.另外,计算PCR的产物不要光看浓度,因为你回收后可以用100ulTE去溶解产物,也可以用50.

各位大神,为什么pcr产物跑不出胶 首先看一下设计的引物在靶序列上有没有结合位点,如果没有,就重新设计;看一下你设置的退火温度和引物Tm值是否匹配;反应循环数是否太少;看一下阳性对照有没有扩增,若是没有则说明反应体系有问题,把物料换了重新扩增;

pcr需要注意的问题 实验操作注意事项:尽管扩增序列的残留污染大部分是假阳性反应的原因,样品间的交叉污染也是原因之一。因此,不仅要在进行扩增反应是谨慎认真,在样品的收集、抽提和扩增的所有环节都应该注意:1、戴一次性手套,若不小心溅上反应液,立即更换手套。2、使用一次性吸头,严禁与PCR产物分析室的吸头混用,吸头不要长时间暴露于空气中,避免气溶胶的污染。3、避免反应液飞溅,打开反应管时为避免此种情况,开盖前稍离心收集液体于管底。若不小心溅到手套或桌面上,应立刻更换手套并用稀酸擦拭桌面。4、操作多份样品时,制备反应混合液,先将dNTP、缓冲液、引物和酶混合好,然后分装,这样即可以减少操作,避免污染,又可以增加反应的精确度。扩展资料CR由变性→退火→延伸三个基本反应构成:1、模板DNA的变性:模板DNA经加热至93℃左右一定时间后,使模板DNA双链或经PCR扩增形成的双链DNA解离,使之成为单链,以便它与引物结合,为下轮反应作准备。2、模板DNA与引物的退火(复性):模板DNA经加热变性成单链后,温度降至55℃左右,引物与模板DNA单链的互补序列配对结合。3、引物的延伸:DNA模板-引物结合物在72℃、DNA聚合酶(如TaqDNA聚合酶)的作用下,以dNTP为反应。

#pcr循环数对跑胶的影响

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