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耐热聚合酶活性温度 TaqDNA聚合酶的校对活性

2021-04-05知识2

耐热DNA聚合酶分哪几类? 由于上述这些不同,可以将耐热DNA聚合酶分为三类:一、普通耐热DNA聚合酶TaqDNA聚合酶由一种水生栖热菌yT1株分离提取出,是发现的耐热DNA聚合酶中活性最高的一种,达200,。

TaqDNA聚合酶的最适温度为74 为什么延伸温度为72 答案C 点拨:Taq DNA聚合酶是从热泉中一株嗜热细菌中提抄取到的,此酶具有以下特点:①耐高温,在95℃下反应2 h后其残百留活性是原来的40%;在70℃下反应2 h后其残留活性大于原来的90%.②在热变性时不会被钝化,不必每次在扩增后再加新酶.③大大提高了扩增片段特异性和扩增效率,增加了扩增长度度.

TaqDNA聚合酶的校对活性 该酶无校对活性,易产生错配碱基。TaqDNA聚合酶的种类a,保真性的一个通用标准是错配率,错配率越低保真性越好。普通 Taq 酶的错配率在 10-5 碱基/循环数,而高保真 Taq 酶错配率可降到 10-6 数量级,大大降低了出错的可能性;它适合对 PCR 保真性要求较高的实验,如基因筛选、测序、突变检测等等。高保真 Taq 酶的保真原理是:高保真 Taq 酶具有 3‘到 5’核酸外切酶的活性。市面上主要有两类产品:一类是混合型的高保真酶,将带有 Proofreading 活性的酶与普通 Taq 酶(用于提高扩增效率)混合起来;另一类是单一型的高保真酶。b,热启动Taq酶(高特异Taq酶):在 PCR 第一个循环变性之前,有一个升温的过程,引物和模板会有一些非特异性配对,如果这时 Taq 酶发挥活性,就很容易产生非特异性扩增,由于循环初期模板量非常少,产生的非特异性条带经过后面的指数扩增,就会严重干扰目的片段的扩增,甚至导致特异性条带不能扩出;而热启动 Taq 酶是必需经过高温才能激活的酶,因此在初始循环的变性之前它没有活性,不会产生非特异性扩增,这就大大提高了 PCR 扩增的特异性。c,高耐热Taq酶:对于有些模板变性温度较高,需要时间较长,可能要求高耐热性 Taq 酶,如 。

#耐热聚合酶活性温度

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