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单链探针法标定聚合酶活性 基因探针是 单链DNA吗

2021-04-04知识10

简述三种DNA聚合酶的作用特点和主要功能

请问什么叫DNA的热变性?它有什么特征?DNA的热变性是指DNA分子在加热条件下由稳定的双螺旋结构松解为无规则线性结构的现象。变性后的DNA的特征:1、溶液黏度:-变性,dna,。

什么是klenow酶?有哪些活性?在基因工程中有什么作用 Klenow 酶是 1974 年 Klenow 用枯草杆菌蛋白酶水解 DNA 聚合酶 I,得到两个片段,其中大片段的分子量为636f70793231313335323631343130323136353331333337623464 75kDa,它具有 5'-3' 聚合酶和 3'-5' 外切核酸酶的活性,小片段具有 5'-3' 外切核酸酶活性。由于大片段失去了 DNA 聚合酶 I 中会降解 5' 引物的 5'-3' 外切核酸酶的活性,所以在基因工程中更有用。Klenow 酶主要有下列用途:(1)修复反应,制备平末端 可用 Klenow 酶修复限制性内切核酸酶或其他方法产生的 5' 或 3' 突出末端,制备平末端,这样可以使原来具有不相容的黏性末端的DNA 片段通过平末端重组。如在反应系统中加入放射性同位素标记的脱氧核苷酸,用这种末端填补的方法可以制备 3' 末端标记的探针。用 Klenow 酶修复 5' 突出末端的反应主要是利用了 Klenow 酶的 DNA 聚合酶活性,是填补反应;而修复 3' 突出末端则是用 Klenow 酶的3'-5' 外切核酸酶的活性,是切割反应。用 Klenow 酶的切割反应来修复 3' 突出末端是不理想的,改用 T4DNA 聚合酶或其他的酶是更好的选择。(2)标记 DNA3' 突出末端(protruding end)该反应分两步进行:先用 3'-5' 的外切核酸酶活性除去 3' 突出末端,产生 3' 隐含末端。

#单链探针法标定聚合酶活性

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