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pcr技术dna模板如何获得 基因组重复序列pcr技术

2021-04-04知识10

高中生物pcr技术扩增的是两引物之间的核苷酸序列是什么意思 首先有一段双链模板DNA,根据模板DNA两端的序列设计两条引物,每条引物与其中一条链互补。如下图所示。引物1->;5‘XXXXXXXXXX 3’3‘XXXXXXXXXX 5’引物2在PCR反应过程中,每条引物结合一条模板DNA链,从5‘-3’方向开始扩增,所以最后扩增得到的序列就只能是在两条引物之间的序列。可以找一些原理图看一下,就比较容易理解了。

简述PCR技术的基本原理及反应条件的选择 PCR技术概论http://shiyan.ebioe.com/PCRPE-CetusMullisTaqDNA_3.htm(Polymerase Chain Reaction,PCR)是80年代中期发展起来的体外核酸扩增技术.它具有特异、敏感、产率高、快速、简便、重复性好、易自动化等突出优点;能在一个试管内将所要研究的目的基因或某一DNA片段于数小时内扩增至十万乃至百万倍,使肉眼能直接观察和判断;可从一根毛发、一滴血、甚至一个细胞中扩增出足量的DNA供分析研究和检测鉴定.过去几天几星期才能做到的事情,用PCR几小时便可完成.PCR技术是生物医学领域中的一项革命性创举和里程碑.PCR技术简史PCR的最早设想 核酸研究已有100多年的历史,本世纪60年代末、70年代初人们致力于研究基因的体外分离技术,Korana于1971年最早提出核酸体外扩增的设想:“经过DNA变性,与合适的引物杂交,用DNA聚合酶延伸引物,并不断重复该过程便可克隆tRNA基因”.PCR的实现 1985年美国PE-Cetus公司人类遗传研究室的Mullis 等发明了具有划时代意义的聚合酶链反应.其原理类似于DNA的体内复制,只是在试管中给DNA的体外合成提供以致一种合适的条件-摸板DNA,寡核苷酸引物,DNA聚合酶,合适的缓冲体系,DNA变性、复性及延伸的温度与时间.PCR的改进与完善最初使用的DNA聚合酶是。

简述PCR技术操作步骤 PCR即聚合酶链式反2113应(Polymerase chain reaction)的缩写,它是体5261外酶促合成特异DNA片段的方法4102。这一方法的要点是合成两个1653分别互补于待扩增DNA片段两端的小片段引物,在含有引物、待扩增DNA模板核苷酸底物和DNA多聚酶的反应体系中DNA复制反复进行,在短时间内可以取得大量扩增产物。其原理是寡聚核苷酸链引物在DNA聚合酶的作用下沿模板延伸,合成两个与靶DNA两侧序列互补的引物,在体外进行靶DNA的重复合成。主要的技术步骤是:(1)DNA变性 加热使靶DNA序列双链解离成单链DNA。(2)引物与靶DNA退火 适当降低温度,使两个引物分别结合成靶DNA两条的3′末端向5′末端延伸。(3)引物延伸 在DNA聚合酶的催化下,引物沿着靶DNA3′末端向5′末端延伸。新合成的DNA链在变性解离后,又可作为模板与引物杂交,并且在DNA聚合酶的催化下,引导合成新的靶DNA链。如此反复进行以上3个步骤,即可使靶DNA片段指数性扩增。

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