怎样用紫外分光光度计测DNA质量和浓度？ dna测量紫外分光光度法

电泳法和紫外分光光度法检测DNA的浓度和纯度，哪种方法更好 两种方法各有优劣。电泳法更直观，如果你有DNA Maker，并且知道Maker的浓度，就可以使用一维条带分析软件如Quantity One分析样品中DNA的含量，而且可以很直观地了解目的DNA的纯度、大小等特性。但是，由于电泳中染色特异性很强，对DNA、RNA之外的小分子污染情况无法检测。紫外法可对样品中所有具紫外吸收特性的物质给出一个综合的结果。因此如果样品中有其他影响DNA后续操作的物质，样品吸光值就会有很大偏移。值得注意的是，紫外法仅可作为一个参考，吸光值是结果，而不是原因。吸光值符合要求并不能代表DNA纯度符合要求。一般紫外分析后还是要跑个电泳，两者结合就可靠多了。如何用紫外分光光度计测DNA浓度？ 实验原理DNA/RNA在260nm处有最大的吸收峰，蛋白质在280nm处有最大的吸收峰，盐和小分子则集中在230nm处。因此，可以用260nm波长进行分光测定DNA浓度，OD值为1相当于大约50μg/ml双链DNA。如用25px光径，用H2O稀释DNA/RNA样品n倍并以H2O为空白对照，根据此时读出的OD260值即可计算出样品稀释前的浓度：DNA（ug/ml）=50×OD260读数×稀释倍数。RNA（ug/ml）=40×OD260读数×稀释倍数。DNA/RNA纯品的OD260/OD280为1.8或2.0，故根据OD260/OD280的值可以估计DNA的纯度。若比值较高说明含有RNA，比值较低说明有残余蛋白质存在。OD230/OD260的比值应在0.4-0.5之间，若比值较高说明有残余的盐存在.本实验室机器显示是OD260\\OD230，则比值应在2-2.5之间，偏小则说明有残余盐剩余。实验步骤1.将制备的DNA悬浮溶解于TE缓冲液中[pH8.O，1Ommo1/L的Tris缓冲液，内含〈1mmol/LEDTA〉]或悬浮溶解在灭菌水中(依据DNA含量加水)。2.用可扫描的紫外分光光度计测定制备的DNA/RNA的紫外吸收曲线，测定OD260和OD280，并计算比值：OD260/OD280，纯DNA的此比值约为1.8～2.0。纯RNA的此比值约为大于2.0。3.根据：每毫升1微克的纯DNA的OD260值=0.020，计算所得DNA的纯度；每毫升1微克的纯RNA的OD260值=0。如何用紫外吸收法测定DNA含量？ 紫外吸收法测定DNA含量，组成核酸分子的碱基，均具有一定的吸收紫外线特性，最大吸收值在波长为250~270nm之间。核酸的最大吸收波长是260nm，这个物理特性为测定核酸溶液浓度提供了基础。在波长260nm紫外线下，1OD值的光密度相当于双链DNA浓度为50μg/ml；单链DNA或RNA为20μg/ml。可以次来计算核酸样品的浓度。分光光度法不但能确定核酸的浓度，还可通过测定在260nm和280nm的紫外线吸收值的比值(A260/A280)估计核酸的纯度。DNA的比值为1.8，RNA的比值为2.0。若DNA比值高于1.8，说明制剂中RNA尚未除尽。RNA、DNA溶液中含有酚和蛋白质将导致比值降低。270nm存在高吸收表明有酚的干扰。当然也会出现既含蛋白质又含RNA的DNA溶液比值为1.8的情况，所以有必要结合凝胶电泳等方法鉴定有无RNA。或用测定蛋白质的方法检测是否存在蛋白质。紫外分光光度法只用于测定浓度大于0.25μg/ml的核酸溶液。对于很稀的溶液可采用荧光光度法。生物帮上面有相关的方法步骤的，大脑模型 http：//product.bio1000.com/100057/

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