pcr反应模板DNA浓度最低要求是多少？ 模板DNA浓度主要看你的PCR扩增体系所使用的62616964757a686964616fe58685e5aeb931333365643661酶：1、一般普通的酶，DNA模板量在50到100ng都可以扩增出来的2、高效一点的酶，几ng也可以扩增出来的。1、PCR反应步骤：类似于DNA的天然复制过程，其特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物。PCR由变性-退火-延伸三个基本反应步骤构成2、PCR反应五要素：①引物（Primer）、②酶（Taq DNA Polymerase）、③dNTP（dATP，dGTP，dCTP，dTTP）、④模板（Template）、⑤Mg2+（Magnesium）3、引物：引物是PCR特异性反应的关键，PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上，只要知道任何一段模板DNA序列，就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物，利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。4、酶及其浓度：目前有两种Taq DNA聚合酶供应，一种是从栖热水生杆菌中提纯的天然酶，另一种为大肠菌合成的基因工程酶。催化一典型的PCR反应约需酶量2.5U(指总反应体积为100ul时)，浓度过高可引起非特异性扩增，浓度过低则合成产物量减少。5、模板核酸的量与纯化程度，是PCR成败与否的关键环节之一，传统的DNA纯化方法通常采用SDS和蛋白酶K来消化处理标本。SDS的主要功能是：。
PCR引物浓度一般选多少 PCR引物浓度一般选5～20μmol/L。PCR反应2113五要素：参加5261PCR反应的物质主要有五种即：引物4102(PCR引物为DNA片段，细胞内DNA复制的引物为一段RNA链）1653、酶、dNTP、模板和缓冲液（其中需要Mg2+）。引物有多种设计方法，由PCR在实验中的目的决定，但基本原则相同。PCR所用的酶主要有两种来高段源：Taq和Pfu，分别来自两种不同的噬热菌。其中Taq扩增效率高但易发生错配。Pfu扩增效率弱但有纠错功能。所以实际使用时根据需要必须做不同的选择。模板即扩增用的DNA，可以是任何来源，但有两个原则，第一纯度必须较高，第二浓度不能太高以免抑制。缓冲液的成分最为复杂，除水外一般包括四个有效成分：缓冲体系，一般使用HEPES或MOPS缓冲体系；一价阳离子，一般采用钾离子，但在特殊情况下也可使用铵根离子；二价阳离子，即镁离子。扩展资料PCR技术的基本原理类似于DNA的天然复制过程，其特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物。PCR由变性-退火-延伸三个基本反应步骤构成：①模板DNA的变性：模板DNA经加热至93℃左右一定时间后，使模板DNA双链或经PCR扩增形成的双链DNA解离，使之成为单链戚此誉，以便它与引物结合，为下轮反应作准备；②模板DNA与引物的退火。
实时定量PCR过程中Taq Man探针浓度与模板浓度的关系？ 探针的浓度肯定要比初始加入的DNA模板的浓度高的，而且不是一般的高，而是指数级的，2的几十次方，因为PCR每扩增一次，就要消耗与模板对应浓度的探针，随着扩增的进行模板以指数增长，每个循环需要的探针当然也是指数增长的.
