ZKX's LAB

coip原理及实验步骤 免疫共沉淀试验中细胞裂解液

2021-03-26知识1

动物细胞裂解液特点是什么?请生意经的朋友帮忙解答

免疫共沉淀方法和试剂盒 免疫共沉淀(Co-IP)(http://baike.baidu.com/view/1249653.htm)蛋白免疫共沉淀试剂盒可联系上海优宁维生物科技有限公司,技术支持电子邮件:techserv@univ-bio.combio1688@。

关于免疫共沉淀,免疫共沉淀(Co-Immuoreciitatio)是以抗体和抗原之间的专一性作用为基础的用于研究蛋白质相互作用的经典方法,是确定两种蛋白质在完整细胞内生理性相互。

免疫共沉淀的实验过程 (1)转染后24-48 h 可收获细胞,加入适量细胞裂解e5a48de588b662616964757a686964616f31333361303030缓冲液(含蛋白酶抑制剂),冰上裂解30min,细胞裂解液于4°C,最大转速离心30 min后取上清;(2)取少量裂解液以备Western blot分析,剩余裂解液加1μg相应的抗体加入到细胞裂解液,4°C缓慢摇晃孵育过夜;(3)取10μl protein A 琼脂糖珠,用适量裂解缓冲液洗3 次,每次3,000 rpm离心3 min;(4)将预处理过的10μl protein A 琼脂糖珠加入到和抗体孵育过夜的细胞裂解液中4°C缓慢摇晃孵育2-4h,使抗体与protein A琼脂糖珠耦联;(5)免疫沉淀反应后,在4°C 以3,000 rpm 速度离心3 min,将琼脂糖珠离心至管底;将上清小心吸去,琼脂糖珠用1ml裂解缓冲液洗3-4次;最后加入15μl的2×SDS 上样缓冲液,沸水煮5分钟;(6)SDS-PAGE,Western blotting或质谱仪分析。注意的问题:(1)细胞裂解采用温和的裂解条件,不能破坏细胞内存在的所有蛋白质-蛋白质相互作用,多采用非离子变性剂(NP40或Triton X-100)。每种细胞的裂解条件是不一样的,通过经验确定。不能用高浓度的变性剂(0.2%SDS),细胞裂解液中要加各种酶抑制剂,如商品化的cocktailer。(2)使用明确的。

IP和CoIP有什么区别?简单的说IP就是用抗体把你要的蛋白免疫沉淀下来,然后去检测它。例如蛋白A在细胞内的蛋白量不同,或者有着不同的翻译后修饰,:-coip,ip,区别

coip原理及实验步骤 免疫共沉淀试验中细胞裂解液

coip原理及实验步骤,免疫共沉淀(Co-Immuoreciitatio)是以抗体和抗原之间的专一性作用为基础的用于研究蛋白质相互作用的经典方法。这是确定两种蛋白质在完整细胞内生理性。

#免疫共沉淀试验中细胞裂解液

随机阅读

qrcode
访问手机版