最低0.27元开通文库会员，查看完整内容>；原发布者：花僷好僷未駚WB实验的基本原理及操作流程【实验原理】一个基因表达终极结果是产生相应的蛋白质(或酶)。因此检测蛋白质是测定基因表达的主要标志，检测蛋白质的方法很多，除ELISA法外，也可用与检测DNA和RNA相类似的吸印方法。前两法有“南”和“北”之意，故本法遂被延伸称为Western(西)印迹法，该法能用SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳分辨出与专一抗血清结合的专一性蛋白质。将聚丙烯酰胺凝胶上分辨出的蛋白质转移到硝酸纤维素膜上并与第一抗体共孵。第一抗体专一地与待分离蛋自质的抗原决定簇结合，然后用另一种蛋自质，如135I-蛋白A或辣根过氧化物酶连接的山羊抗IgG检测已结合上去的抗体。本法所需时间6小时或过夜。蛋白质的聚丙烯酰胺凝胶电泳几乎所有蛋白质电泳分析都在聚丙烯酰胺凝胶上进行，而所用条件总要确保蛋白质解离成单个多肽亚基并尽可能减少其相互间的聚集。最常用的方法是将强阴离子去污剂SDS与某一还原剂并用，并通过加热使蛋白质解离后再加样于电泳凝胶上。变性的多肽与SDS结合并因此而带负电荷，由于多肽结合SDS的量几乎总是与多肽的分子量成正比而与其序列无关，因此SDS多肽复合物在聚丙烯酰凝胶电泳中的迁移只与。
伯乐Bio-rad的半干转仪，做WB时不同分子量的转膜条件小弟实验室做WB转膜时是用的Bio-rad的半干转仪，21KD-65KD，我们的转膜条件是12V，15min，可是考马斯亮蓝染胶还发现好多条带，所以特求不同分子量转膜的时间及电流电压等条件是什么？急求。
做wb转膜过程出现很多泡沫是什么原因 上多浇一点甲醇，胶上多带点trans 上多浇一点甲醇，胶上多带点trans buffer，胶放到膜上的时候，一边放到胶上，再慢慢往下放，有助于赶走气泡。同问。
