同一个样 PCR 三次 结果趋势 为什么不同 对PCR扩增反应的终点产物进行定量和定性分析，无法对起始模板准确定量，以电泳为基础的半定量RT-PCR本身误差比较大.一般情况下，要做好半定量的RT-PCR，注意以下几点：1、做混合管，减少系统误差2、选择质量好的移液器和.
为什么转录组测序 后 用定量pcr 验证 答：外显捕获测序转录组测序都针基组转录区域进行测序外显捕获测序针已基组信息物种转录组析既能针已基组信息物种能针没基组信息新物种两者析存定差异：（1）析目标区域所同外显捕获测序针基组已知编码区转录组测序仅针基组已知编码区能够检测非编码RNA等转录组信息（2）析手段所同外显捕获测序需要测序结比基组析序列差异转录组测序既测序结比基组进行（de Novo）拼接（3）结所同外显捕获测序序列变异信息转录组测序仅获已知序列变异信息新转录本信息（针拼接）表达谱信息除外转录组测序能够析mRNA变剪接外显捕获测序品源基组能够进行mRNA变剪接析能够外显序列变化
求助荧光定量PCR，我的实验组和对照组的目的基因CT值非常相近，但是两组内参基因的CT值相差5左右，正常吗 肯定不行的。荧光2113定量pcr通过以内参基因作为标准5261进行相4102对定量，即众所周知的2–ΔΔCT 法，（前提是1653要求在所有测试样本中恒定表达的已知参照基因，而且表达水平不受研究条件及处理方式的影响）。如果实验组和对照组的目的基因ct值非常接近（前提是cDNA稀释的倍数一致），说明二者的目的基因无明显变化呀。4.2.3.1 2–ΔΔCT(Livak)方法进行相对基因表达分析普遍采用操作简便的2–ΔΔCT 法，条件是目标基因和参照基因扩增效率都接近100%且相互间效率偏差在5%以内。使用2–ΔΔCT 法之前，必须验证目标基因和参照基因的扩增效率。一旦确定目标基因和参照基因有相似且接近100%的扩增效率，你就可以确定不同样本中目标基因表达水平的相对差异，步骤如下：首先，对所有的测试样和校准样本，用内参基因的CT 值归一目标基因的CT 值：ΔCT(test)=CT(target，test)– CT(ref，test)ΔCT(calibrator)=CT(target，calibrator)– CT(ref，calibrator)其次，用校准样本的ΔCT 值归一试验样本的ΔCT 值：ΔΔCT=ΔCT(test)– ΔCT(calibrator)最后，计算表达水平比率：2–ΔΔCT=表达量的比值得到的结果是通过参照基因表达水平校准的试验样本中目标基因。
