ZKX's LAB

请问DNA聚合酶活性的测定方法是什么? 聚合酶活性检测

2021-03-19知识1

DNA聚合酶的举例 大肠杆菌DNA聚合酶1、大肠杆菌DNA聚合酶Ⅰ(DNApolymeraseⅠ,DNApolⅠ)这是1956年由ArthurKornberg首先发现的DNA聚合酶,又称Kornber酶。此酶研究得清楚而且代表了其他DNA聚合酶的基本特点。⑴理化性质:纯化的DNApolⅠ由一条多肽链组成,约含1000个氨基酸残基,MW为109KD。分子含有一个二硫键和一个-SH基。通过二个酶分子上的-SH基与Hg2+结合产生二聚体,仍有活性。每个酶分子中含有一个Zn2+,在DNA聚合反应起着很重要的作用。每个大肠杆菌细胞中含有约400个分子,每个分子每分钟在37℃下能催化667个核苷酸掺入正在生长的DNA链。经过枯草杆菌蛋白酶处理后,酶分子分裂成两个片段,大片段分子量为76KD,通常称为Klenow片段,小片段的分子量为34KD。此酶的模板专一性和底物专一性均较差,它可以用人工合成的RNA作为模板,也可以用核苷酸为底物。在无模板和引物时还可以从头合成同聚物或异聚物。DNAPolⅠ在空间结构上近似球体,直径约65A。在酶的纵轴上有一个约20A的深沟(cleft),带有正电荷,这是该酶的活性中心位置,在此位置上至少有6个结合位点:[1]模板DNA结合位点;[2]DNA生长链或引物结合位点;[3]引物末端结合位点,用以专一引物或DNA生长链的3'-OH;[4]。

请问DNA聚合酶活性的测定方法是什么? 除了细胞内的黏合反应,随着分子生物学的进展,几乎大多数的分子生物实验室都会利用DNA黏合酶来进行重组DNA的实验,或许这也可以被规类为其另一种重要的功能

请问DNA聚合酶活性的测定方法是什么? 聚合酶活性检测

请问DNA聚合酶活性的测定方法是什么?DNA聚合酶作用于单个的脱氧核苷酸的磷酸二酯键,而DNA连接酶作用于DNA片段间的磷酸二酯键。1、DNA连接酶:DNA连接酶也称DNA黏合酶,在。

#聚合酶活性检测

随机阅读

qrcode
访问手机版