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核算变性浮力密度 在核算分子杂交中为什么都使用碱变性而不使用酸变性

2021-03-11知识6

dna变性时为什么沉降系数上升 s=v/ω2r.s是沉降系数,ω是2113离心转子的角速度5261(弧度/秒),r是到旋转中心的距离,v是沉4102降速度.基本1653原理物体围绕中心轴旋转时会受到离心力F的作用.当物体的质量为 M、体积为V、密度为D、旋转半径为r、角速度为ω(弧度数/秒)时,可得:F=Mω2r 或者 F=V.D.ω2r(1)上述表明:被离心物质所受到的离心力与该物质的质量、体积、密度、离心角速度以及旋转半径呈正比关系.离心力越大,被离心物质沉降得越快.在离心过程中,被离心物质还要克服浮力和摩擦力的阻碍作用.浮力F}和摩擦力F}}分别由下式表示:F’=V.D’.ω2r(2)F’’=f dr/dt(3)其中D}为溶液密度,f为摩擦系数,dr/dt为沉降速度(单位时间内旋转半径的改变).基本原理在一定条件下,可有:F=F’+F’’V.D.ω2r=V.D’ω2r+f.dr/dtdr/dt=Vω2r(D-D’)/f(4)式(4)表明,沉降速度与被离心物质的体积、密度差呈正比,与f成反比.若以S表示单位力场(ω2r=1)下的沉降速度,则S=V(D-D’)/fS即为沉降系数.DNA变性后相互聚集,体积增加.

核算变性浮力密度 在核算分子杂交中为什么都使用碱变性而不使用酸变性

DNA变性后理化性质有下述改变: 答案B核酸的变性指核酸双螺旋区的氢键断裂,变成单链的无规则的线团,并不涉及共价键的断裂.一系列物化性质也随之发生改变:粘度降低,浮力密度升高等,同时改变二级结构,有时可以失去部分或全部生物活性.DNA变性后,由于双螺旋解体,碱基堆积已不存在,藏于螺旋内部的碱基暴露出来,这样就使得变性后的DNA对260nm紫外光的吸光率比变性前明显升高(增加),这种现象称为增色效应.因此判断只有B对.

在核算分子杂交中为什么都使用碱变性而不使用酸变性DNA可以用碱变性而RNA不能采用碱变性的原因:因为DNA耐碱,而RNA中核糖的2‘羟基还在,可以在碱性条件下攻击磷酸二酯键,使其断裂。碱变性法提取质粒DNA原理:普遍采用的碱变性法具有操作简便、快速、得率高的优点。其主要原理是,利用染色体DNA与质粒DNA的变性与复性的差异而达到分离目的。在碱变性条件下(pH 12.6),染色体DNA的氢键断裂,双螺旋结构解开而变性,质粒DNA氢键也大部分断裂,双螺旋也有部分解开,但共价闭合环状结构的两条互补链不会完全分离,当以pH 4.8的乙酸钠将其pH调到中性时,变性的质粒DNA又恢复到原来的构型,而染色体DNA不能复性,形成缠绕的致密网状结构,离心后,由于浮力密度不同,染色体DNA与大分子RNA、蛋白质SDS复合物等一起沉淀下来而被除去。分离质粒DNA的方法一般包括3个基本步骤:培养细菌使质粒扩增;收集和裂解细菌;分离和纯化质粒DNA。

核酸变性后的反应有哪些? 260nm处的光吸收值会升高,是最大的一个变化,称为增色效应.其他的有:溶液粘度下降,比旋度下降,浮力密度升高,酸碱滴定曲线改变,生物活性丧失.

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