elisa检测到目的蛋白但是wb怎么都做不出来 这是很正常的，ELISA一般可以检测到ng级的蛋白，而WB的检测限是10微克级的。除非你用ELISA检测到蛋白含量很大，达到了10微克级以上，这时wb做不出来就值得找找原因了。
wb 怎么定量 是用目的蛋白除以内参蛋白吗 actingapdh万能2113内参主要看你的目标蛋白的分子量5261多大，“目标蛋白要与4102内参蛋白的分子量差异大！1653方便检测核蛋白，有很多种，分子量不同膜蛋白，有很多很多种，分子量不同浆蛋白，有成千上万种，分子量不同。具体实验，具体目的蛋白，具体的内参。
WB前一定要做蛋白浓度测定吗 一抗的用量和样品中的目标分子含量相关，如果含量较高，就不需要用太多一抗，以免浪费和条带太亮不易分析。推荐采用厂家的抗体浓度（义翘神州会提供抗体用量、天然细胞株检测结果），如果样品与厂家的不是一种细胞，可以尝试上下摸索一两个浓度梯度；二抗的用量，和你所在实验室常规的用量就可以，如果出现效果不理想的状态，二抗的作用可以通过阳性对照和阴性对照、以及其他人的使用效果看出来有没有问题。
做wb的bax和bcl-2的目的蛋白时会出现时间长的细胞凋亡而导致内参出不来吗 α-平滑肌肌动蛋白是23kD。1、如果是提取的总蛋白，然后做WB，用β-actin或者GAPDH做内参肯定是。
WB实验组织总蛋白提取方法 最低0.27元开通文库会员，查看完整内容>；原发布者：yymnz1241082WB组织总蛋白提取步骤第一步提取组织蛋白上清液1，准备裂解液（e799bee5baa6e59b9ee7ad94313334336237661）溶PMSF（将PMSF晶体溶到PMSF溶剂中，即配成10ml100mM的PMSF液体）（2）裂解液的制备组成：PIRA裂解液+PMSF溶剂+蛋白酶抑制剂10mlPIRA=100ulPMSF=1片蛋白酶抑制剂（3）将配好的裂解液放在4℃备用。2，研磨组织（心尖）（1）准备研钵，药勺（2把），长镊子，保温箱（里面放入冰块），汤勺，离心管，天平，手套（2幅），液氮，冰盘，振荡器。（2）将所有接触到组织的工具用液氮预冷。（3）1人负责将组织组织给研磨者并随时加液氮（此人必须记住每次研磨者所研磨的组织的编号）2人研磨组织（多次快速），同时一人将1.5ml离心管编号预冷去皮。（4）将研磨好的组织放在去皮处理的对应的离心管中称重。（用大白纸记录好每个样的重量，便于离心时配平用）。（5）加裂解液（1mg组织加6ul裂解液）。（6）震荡混匀后放入冰盘上，等所有的样加完后一齐在摇床上摇1h。3，离心提取蛋白上清液（1）提前30min预冷离心机（4℃）。（2）配平。（3）离心，按照配平时的组放样（13000r，5min）。（4）取上清液，储存在-20℃。
【求助】WB上样量应为多少？
做好多次WB实验，只有杂带却没有目的条带，内参能出来说明蛋白没有问题，请高手指点一下是什么原因，师兄让我换家抗体试试，有推荐吗？急！！！ 80%是你用的抗体质量问题，建议楼主不要怕花钱，试下进口品牌 CST \\CHI scientific\\R&D 都是不错的
