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紫外分光光度计的结构和原理

2021-03-09知识5

紫外-可见光分光光度计 原理,基本构造,使用方法,注意事项及应用 一、分光光度计的基2113本工作原理随着现代科技的不断5261发展和进步,现代4102分光光度法的测试手段1653和方法都在不断改进,但最根本的依据仍然建立在朗伯-比尔定律的基础之上。A=KLC式中:A-为被测物在给定波长的需光吸光度值K-为一系数,称为溶液的吸收系数(与入射光波长及被测物质的特性有关)L-为被测物质的厚度(一般与比色池的厚度有关)C-为被测物质的浓度由上式可以看出,被测物质对单色光的吸光度与被测物质的浓度成正比。实际测试时,单色光通过被测物质达到光电接收器,由光电倍增管或光电池转换成光电流,而光电流的强弱决定了吸光度值A的大小。假定通过参比样品的光电流为I。而通过待测样品的光电流为I,则两者之比设定为τ,也称透射比(或以T%表示,称为透过率)。则:τ=I/I。100%朗伯-比尔定律的贡献就是发现了透射比的负对数值(也就是吸光度A)的变化与物质的浓度的变化呈正比关系。即:A=-lgτ或lg(I/I。KCL同时,不同的物质对不同波长的单色光呈现出不同的吸光度值,这一变化特征也就是分光光度法用于物质的定性定量分析的理论基础。基于上述原理,你可以知道无论以往的仪器还是现代的仪器,其最基本的工作要求就是为了能准确获得。

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紫外分光光度计的结构和原理

紫外可见分光光度计的结构、工作原理与应用

紫外-可见光分光光度计原理,基本构造,使用方法,注意事项及应用 可见-紫外分光光度计的工作原理基于朗伯-比尔(Lambert-Beer)定律,即物质在一定浓度的吸光度与它的吸收。

紫外分光光度计的工作原理是什么?

使用紫外可见分光光度计测蛋白质结构的原理是什么?如果出现负值是什么原因呢?(PS:已测过基线) 紫外可见分光光度计测定的是蛋白浓度,X射线晶体衍射测的才是蛋白质结构.紫外分光光度计测蛋白浓度原理:组成蛋白质的氨基酸里,有三种氨基酸:苯丙氨酸,酪氨酸,色氨酸具有苯环的共轭结构,它们对特定波长的紫外线具有吸收光谱,也就是说:它们对紫外线是有颜色的.每种蛋白质根据苯环的数量和分布都有一定的吸收强度,总的吸收值和分子的浓度呈正比.根据蛋白质溶液对280nm紫外线的吸收强度,可以测定出蛋白质的浓度.X射线晶体衍射测蛋白结构原理:蛋白质的肽链不是杂乱无章的,按照一定的规则盘曲成了特定的形状(蛋白质高级结构),每个碳-碳键都有它特定的构象,这种特定的结构是蛋白质作为分子机器的基础.结晶的蛋白质中,分子排成了空间重复的有序的结构,而原子之间的间隙与X射线的波长类似,构成了X射线的衍射光栅.当用X射线照射这种重复性的天然光栅时,通过波的衍射形成了有规则的干涉条纹,分析这些条纹就可以解析出蛋白质分子中每个原子的位置.

最低0.27元/天开通文库会员,可在文库查看完整内容>;原发布者:wheatchem紫外可见分光光度计原理及操作潘睿睿目录紫外-可见分光光度计仪器原理1紫外-可见分光光度计结构及类型23UV-Vis分光光度法的应用和分析条件的选择4UV-Vis分光光度计的保养与故障处理一、紫外-可见分光光度计仪器原理原理波长2004008003200(nm)g-X-射线紫外可见红外微波无线电真空紫外近红外核磁共振波长越短,能量越高原理1)分子吸收光谱的形成过程:运动的分子外层电子-吸收外来外来辐射-产生电子能级跃迁-分子吸收谱。2)由于各种物质具有各自不同的分子、原子和不同的分子空间结构,其吸收光能量的情况也就不会相同。因此,每种物质就有其特有的、固定的吸收光谱曲线,可根据吸收光谱上的某些特征波长处的吸光度的高低判别或测定该物质的含量,这就是分光光度定性和定量分析的基础。3)紫外分光光度法使用基于朗伯-比耳定律(Lambert-Beer)。朗伯-比耳定律是光吸收的基本定律,俗称光吸收定律,是分光光度法定量分析的依据和基础。朗伯-比耳定律一、透射率T%透射光I入射光I0光程长bI透射率T%×100%I0朗伯-比耳定律当入射光波长一定时,待测溶液的吸光度A与其浓度和液层厚度成正比,即Akbck为比例。

紫外可见分光光度计--原理及使用 去文库,查看完整内容>;内容来自用户:lezai945应用分光光度计已62616964757a686964616fe59b9ee7ad9431333433646366经成为现代分子生物实验室常规仪器。常用于核酸、蛋白定量以及细菌生长浓度的定量。我们实验室主要是用来测物质的光度以求得物质的浓度或者酶活。基本原理分子的紫外可见吸收光谱是由于分子中的某些基团吸收了紫外可见辐射光后,发生了电子能级跃迁而产生的吸收光谱。它是带状光谱,反映了分子中某些基团的信息,可以用标准光谱图再结合其它手段进行定性分析。朗伯-比尔定律:当一束平行单色光通过含有吸光物质的稀溶液时,溶液的吸光度与吸光物质浓度、液层厚度乘积成正比,即A=kcl式中比例常数k与吸光物质的本性,入射光波长及温度等因素有关。c为吸光物质浓度,l为透光液层厚度。组成各种型号的紫外-可见分光光度计,就其基本结构来说,都是由五个基本部分组成,即光源、单色器、吸收池、检测器及信号指示系统。1.光源在紫外可见分光光度计中,常用的光源有两类:热辐射光源和气体放电光源。热辐射光源用于可见光区,如钨灯和卤钨灯;气体放电光源用于紫外光区,如氢灯和氘灯。2.单色器单色器的主要组成:入射狭缝、出射狭缝、色散元件和准直镜。

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