在紫外可见分光光度法的定量分析中误差来源有几个方面?如何避免? 紫外—可见分光光度分析法一、基本要求掌握:本章要求掌握分光光度法的特点、基本原理、测定方法及计算方法;分子吸收光谱与电子跃迁类型,物质对光的选择吸收与吸收光谱曲线,摩尔吸收系数与吸收系数,吸光度与透光度,偏离朗伯-比尔定律的原因;掌握显色反应条件及光度测量条件的选择;掌握紫外—可见分光光度计的主要部件,各部件的作用及仪器原理,主要类型及特点;掌握差示分光光度法的原理、特点.理物质分子结构与紫外吸收光谱的关系,吸收波长位移与分子结构变化的关系;紫外—可见分光光度定量分析影响结果准确度的各种因素.了了解紫外—可见分光光度法测定灵敏度和选择性的途径;双波长分光光度法等其它分光光度法定量测定的方法;紫外—可见分光光度法在有机化合物的结构解析方面的作用及在其他方面的应用.二、基本概念与重点内容A概述1.紫外—可见分光光度法的特点灵敏度与准确度较高;选择性较好;设备简单、操作简便.2.分光光度法的发展过程目视比色法 光电比色法 分光光度法3.分子的紫外—可见吸收光谱分子的紫外—可见吸收光谱是基于物质分子吸收紫外辐射或可见光,其外层电子跃迁而成,又称分子的电子跃迁光谱.紫外—可见分光光度法是基于物质分子的。
如何用紫外分光光度计测DNA浓度 首先,分光光度计测量的样品必须是均一的,摇匀后再测量结果会准确些。它是利用62616964757a686964616fe59b9ee7ad9431333363393636分光光度法对物质进行定量定性分析的仪器。核酸的定量是分光光度计使用频率最高的功能。可以定量溶于缓冲液的寡核苷酸,单链、双链DNA,以及RNA。核酸的最高吸收峰的吸收波长260 nm。每种核酸的分子构成不一,因此其换算系数不同。定量不同类型的核酸,事先要选择对应的系数。如:1OD 的吸光值分别相当于50μg/ml的dsDNA,37μg/ml的ssDNA,40μg/ml的RNA,30μg/ml的Olig。测试后的吸光值经过上述系数的换算,从而得出相应的样品浓度。测试前,选择正确的程序,输入原液和稀释液的体积,尔后测试空白液和样品液。然而,实验并非一帆风顺。读数不稳定可能是实验者最头痛的问题。灵敏度越高的仪器,表现出的吸光值漂移越大。事实上,分光光度计的设计原理和工作原理,允许吸光值在一定范围内变化,即仪器有一定的准确度和精确度。如Eppendorf Biophotometer的准确度≤1.0%(1A)。这样多次测试的结果在均值1.0%左右之间变动,都是正常的。另外,还需考虑核酸本身物化性质和溶解核酸的缓冲液的pH值,离子浓度等:在测试时,离子浓度太高,也。
紫外方法验证时定量限、检测限怎么做? 分别取上述6个浓度的线性测试溶液,按照紫外分光光度计操作规程,用1cm吸收池,在231nm波长处,测定各自吸收度。4.3.3 线性统计:以吸收度为纵坐标,测试溶液的浓度为横。
紫外_可见分光光度法,用吸收系数法定量,公式是什么? A=ECL C=A/ELA为吸收度;T为透光率2113;E为吸收系数,采5261用的表示方法是(4102E1%1cm),其物理意义为当溶1653液浓度为1%(g/ml),液层厚度为1cm时的吸收度数值;C为100ml溶液中所含被测物质的重量(按干燥品或无水物计算),g;L为液层厚度,cm。紫外-可见分光光度法是在190~800nm波长范围内测定物质的吸光度,用于鉴别、杂质检查和定量测定的方法。当光穿过被测物质溶液时,物质对光的吸收程度随光的波长不同而变化。因此,通过测定物质在不同波长处的吸光度,并绘制其吸光度与波长的关系图即得被测物质的吸收光谱。从吸收光谱中,可以确定最大吸收波长λmax和最小吸收波长λmin。物质的吸收光谱具有与其结构相关的特征性。因此,可以通过特定波长范围内样品的光谱与对照光谱或对照品光谱的比较,或通过确定最大吸收波长,或通过测量两个特定波长处的吸收比值而鉴别物质。用于定量时,在最大吸收波长处测量一定浓度样品溶液的吸光度,并与一定浓度的对照溶液的吸光度进行比较或采用吸收系数法求算出样品溶液的浓度。原理可见光、紫外线照射某些物质,主要是由于物质分子中价电子能级跃迁对辐射的吸收,而产生化合物的可见紫外吸收光谱。基于物质对光的选择。
紫外可见分光光度计测定六价铬检出限具体怎么算? 检测限(灵敏度)即相对于空白可检测的样品最小含量。采用标准差法:空白值为0时,①测定背景10次以上,求出标准差s;②将s乘以三倍;③用3s除以标准曲线的斜率,即为方法的检出限。懂?
紫外可见分光光度计定量分析的原理和方法是怎样的
紫外可见分光光度法定量检测样品的一般流程是什么? 1、检查仪器;2、预热,同时配制待测样品对应的标准样(一般用高纯度试剂配制);3、待测样预处理;4、先根据国标或推荐检测方法测标准样的吸光度,然后测待测样的吸光度;。