紫外光吸收法测定蛋白质浓度时，为什么要同时测定280nm及260nm的吸光度 紫外吸收检测2113DNA浓度与纯度2007年11月13日5261 星期二 11：40目的：了解紫外吸收检测DNA浓度与纯4102度的原理，掌握测定方法.原理：1653 核酸的最大吸收波长为260nm，蛋白质为280nm，在波长260nm时，1OD值相当于双链DNA浓度为50μg/ml，单链 寡核苷酸的含量为30μg/ml，可以据此来计算核酸样品的浓度，还可通过测定在260nm和280nm的OD值的比值（OD260/OD280），估计核酸的纯度.纯净DNA的比值为1.8，RNA为2.0.若比值高于1.8说明DNA样品中的RNA尚未除 尽，若样品中含有酚和蛋白质将导致比值降低.270nm存在高吸收表明有酚的干扰.紫外分光光度法只能用于测定浓度 大于0.25μg/ml的核酸溶液，对浓度更小的样品，可采用荧光分光光度法.试剂与仪器：提取的质粒DNA，紫外分光光度仪.操作步骤：1)分光光度计先用水在260nm和280nm两个波长下校零.2)取质粒DNA样品2μl，用水稀释100倍，转入分光光度计的石英比色杯中.3)在260nm和280nm分别读出样品光密度值.如果样品浓度单位为μg/μl，则样品DNA浓度为OD 值的10倍，即如 OD260=0.1，则样品浓度即为1μg/μl.4)若OD260/OD280大于1.8，说明仍有RNA，可以考虑用RNA酶处理样品，若小于1.8，说 明样品中含有蛋白质或酚，应再用酚/氯仿抽提，以乙醇沉淀纯化。
紫外分光光度计的用法 最低0.27元开通文库会员，查看完整内容>；原发布者：Tiffany1571紫外分光光度计操2113作流程1.打开电脑。52612.打开紫外分光4102光度计。3.在电脑屏幕上双击打开软件图1653标。4.单击软件界面上“校零”按钮。5.打开紫外分光光度计上的盖子。6.将“参比液”置于紫外分光光度计的靠里面位置槽。7.将“标准待测液”置于紫外分光光度计的外面位置槽。8.将盖子拉回盖上。9.放好“参比液”样品和“标准待测液”样品后，点击软件上“开始测量”按钮。10.此测量装置不能像例子色谱仪和原子分光光度那样自动计算平行样。例如需要测两次平行样，则需要两次放入紫外分光光度计中对应的平行样品。11.测量完的数据点击“保存”。如需导出数据，则点击导出，选择以Excel形式导出数据即可。12.关闭时先将紫外分光光度计关闭，再关电脑。13.使用比色皿时，两手捏比色皿的两磨砂面，不能碰触比色皿的玻璃透明面，否则会影响吸光度的测量。14.装入比色皿的液体至少得为比色皿高度的2/3.装完液体后，用擦镜纸将比色皿擦拭干净，注意：擦拭时需一个方向擦拭，不要来回乱擦拭。15.比色皿放入紫外分光光度计中时透明玻璃面应对着光照方向。
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纯化蛋白去除内毒素能用分光光度计吗 若你检测的内毒素对光有吸收是可以用分光光度计进行检测的。
紫外分光光度计的用法 使用前仪器要调零、调百校准，参比溶液又称空白溶液。测量时用作比较的、不含被测物质但其基体尽可能与试样溶液相似的溶液。通常，用参比溶液扫描的曲线应是一条平坦的直线。有时，基体中虽不含被测物质，但含有别的物质，这时必须保证其不影响测试。经常碰到的是试剂空白中含有被测物质，此时必须经过纯化将其除去。否则将影响测定结果。在色谱分析中，有时基体中可能存在一个以上的和被测组分相距较远的色谱峰，计算机在数据处理中不会计入它们，不影响测定。以所含铁离子是多少为例：参比溶液与测量溶液就相差铁离子含量，在测量之前要用不含铁离子的参比溶液扫描，调整仪器后（调100的过程），然后再测量含铁离子溶液的比色皿，这样测量溶液中的铁离子会形成自己特定的峰值，次峰值与数据库里基准峰值对比就可以得出溶液所含量了。如果数据库中没有铁离子的曲线，你还要自己先用不同铁离子浓度的溶液做工作曲线，然后进行测量。
紫外_可见分光光度法，用吸收系数法定量，公式是什么？ A=ECL C=A/ELA为吸收度；T为透光率2113；E为吸收系数，采5261用的表示方法是（4102E1％1cm），其物理意义为当溶1653液浓度为1%（g/ml），液层厚度为1cm时的吸收度数值；C为100ml溶液中所含被测物质的重量（按干燥品或无水物计算），g；L为液层厚度，cm。紫外-可见分光光度法是在190~800nm波长范围内测定物质的吸光度，用于鉴别、杂质检查和定量测定的方法。当光穿过被测物质溶液时，物质对光的吸收程度随光的波长不同而变化。因此，通过测定物质在不同波长处的吸光度，并绘制其吸光度与波长的关系图即得被测物质的吸收光谱。从吸收光谱中，可以确定最大吸收波长λmax和最小吸收波长λmin。物质的吸收光谱具有与其结构相关的特征性。因此，可以通过特定波长范围内样品的光谱与对照光谱或对照品光谱的比较，或通过确定最大吸收波长，或通过测量两个特定波长处的吸收比值而鉴别物质。用于定量时，在最大吸收波长处测量一定浓度样品溶液的吸光度，并与一定浓度的对照溶液的吸光度进行比较或采用吸收系数法求算出样品溶液的浓度。原理可见光、紫外线照射某些物质，主要是由于物质分子中价电子能级跃迁对辐射的吸收，而产生化合物的可见紫外吸收光谱。基于物质对光的选择。
蛋白质的提取中如何确定目的蛋白？ 做分子量大小鉴定，质谱就可以做精密分子量分析。PAGE预测分子量存在很大差异，再一方面，western blotting具有不可重复性，效果不好，我做过。希望帮到你。
