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pcr时纯化模板的问题 pcr纯化会损失模板量吗

2021-03-08知识16

pcr反应模板DNA浓度最低要求是多少? 模板DNA浓度主要看你的PCR扩增体系所使用的62616964757a686964616fe58685e5aeb931333365643661酶:1、一般普通的酶,DNA模板量在50到100ng都可以扩增出来的2、高效一点的酶,几ng也可以扩增出来的。1、PCR反应步骤:类似于DNA的天然复制过程,其特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物。PCR由变性-退火-延伸三个基本反应步骤构成2、PCR反应五要素:①引物(Primer)、②酶(Taq DNA Polymerase)、③dNTP(dATP,dGTP,dCTP,dTTP)、④模板(Template)、⑤Mg2+(Magnesium)3、引物:引物是PCR特异性反应的关键,PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上,只要知道任何一段模板DNA序列,就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物,利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。4、酶及其浓度:目前有两种Taq DNA聚合酶供应,一种是从栖热水生杆菌中提纯的天然酶,另一种为大肠菌合成的基因工程酶。催化一典型的PCR反应约需酶量2.5U(指总反应体积为100ul时),浓度过高可引起非特异性扩增,浓度过低则合成产物量减少。5、模板核酸的量与纯化程度,是PCR成败与否的关键环节之一,传统的DNA纯化方法通常采用SDS和蛋白酶K来消化处理标本。SDS的主要功能是:。

请问一下能不能每批PCR后不经纯化直接进行下一批PCR?由于我的目的条带量比较少,需要反复做PCR,而每次纯化PCR产物都会有很大的损失,所以想请问一下能不能不经纯化直接。

病毒DNA做PCR的问题---直接将病毒裂解(比如煮沸)做模板,进行PCR即可 是 你好,我看到了你对这个问题的答案,想详细请教一下,请问这个煮沸是多少温度?多长时间?请问你做过圆环病毒吗?也是这么做的吗?匿名用户 1级 2018-11-27 回答 。

pcr时纯化模板的问题我提的DNA模板 要是纯化了,DNA损失厉害么?我怕一纯化 什么都没了.这里先谢谢各位大侠咯.

pcr的产物可以不可以直接拿来做模板再进行pcr 这个主要是要看你第二次的PCR的引物和你第一次的是否一样如果一样的话 理论上可以 但是纯锋效果很不好 可以保证做不出来如果不一样 而且第二轮PCR的引物是在你的第桥羡一轮PCR产物内的是可以做出来的 而且做消晌不同纯化 这个叫NESTED PCR

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模板的浓度对PCR有什么影响,一般要多大浓度? 那要看你用的是什么模板了.pcr的灵敏度很高,几pg的DNA就能检测出来了.一般用pcr产物或者质粒做模板,只需要1ng左右就可以了,如果是基因组或者cDNA做模板,模板量可适当增加.

模板(靶基因)核酸 模板核酸的量与纯化程度会影响PCR成败与否吗? 模板(靶基因)核酸 模板核酸的量与纯化程度,是PCR成败与否的关键环节之一,传统的DNA纯化方法通常采用SDS和蛋白酶K来消化处理标本。SDS的主要功能是:溶解细胞膜上的脂。

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