最低0.27元开通文库会员，查看完整内容>；原发布者：记忆_染成画紫外分光光度计的使用原理和方法紫外-可见分光光度法(ultraviolet-visiblespectrophotometry，UV-VIS)1定义：它是利用物质的分子或离子对某一波长范围的光的吸收作用，对物质进行定性分析、定量分析及结构分析，所依据的光谱是分子或离子吸收入射光中特定波长的光而产生的吸收光谱。2分类：按所吸收光的波长区域不同：分为紫外分光光度法和可见分光光度法，合称为紫外-可见分光光度法。3、紫外-可见分光光度法的特点：（1)其仪器设备和操作都比较简单，费用少，分析速度快；（与其它光谱分析方法相比）（2）灵敏度高；（3）选择性好；（4）精密度和准确度较高；（5）用途广泛。1.紫外-可见吸收光谱1.物质对光的选择性吸收物质对光的吸收是选择性的，利用被测物质对某波长的光的吸收来了解物质的特性，这就是光谱法的基础。通过测定被测物质对不同波长的光的吸收强度（吸光度），以波长为横坐标，吸光度为纵坐标作图，得出该物质在测定波长范围的吸收曲线。在吸收曲线中，通常选用最大吸收波长λmax进行物质含量的测定。2.有机化合物的紫外-可见吸收光谱2.1有机化合物的电子跃迁与紫外-可见吸收光谱有关的电子有三种，即。
紫外分光光度法对照法中要不要用空白对照？ 当然要用空白了，不过不是为了画标准曲线，空白做参比是为了调节机器的吸光度为零的点.因为溶剂和比色皿都会有反光的作用.溶剂一定程度上也会吸光.
紫外分光光度法 在实际测量中，采用在另一等同的吸收池中放入溶剂与被e69da5e887aa62616964757a686964616f31333236393136分析溶液的透射强度进行比较，即：A=lg(I溶剂/I溶液)≈lg(I 0/I)吸光度具有加和性：A总λ=A1λ+A2λ+…Anλ比尔定律应用的局限性：只适用于稀溶液、化学偏离、仪器偏离Page 84.2 紫外一可见分光光度计Page 91.光源功能：提供能量激发被测物质分子，使之产生电子光谱谱带（提供宽带辐射）。连续光源：广泛应用在吸收和荧光光谱中(气体放电光源)氘灯、氢灯紫外可见氩灯真空紫外氙灯真空紫外、紫外、可见(热辐射光源)钨丝灯、卤钨灯可见光区Page 102.单色器功能：从光源辐射的复合光中分出单色光。3.吸收池功能：盛放分析试样（一般是液体）Page 114.检测器功能：检测光信号，测量单色光透过溶液后光强度变化的一种装置。5.信号显示系统Page 126.紫外一可见分光光度计的类型(1)单波长单光束分光光度计缺点：测量结果受电源波动的影响较大，误差较大。Page 13(2)单波长双光束分光光度计优点：除了能自动扫描吸收光谱外，还可自动消除电源电压波动的影响，减小放大器增益的漂移。Page 14(3)双波长分光光度计优点：在有背景干扰或共存组分的吸收干扰的。
紫外_可见分光光度法，用吸收系数法定量，公式是什么？ A=ECL C=A/ELA为吸收度；T为透光率2113；E为吸收系数，采5261用的表示方法是（4102E1％1cm），其物理意义为当溶1653液浓度为1%（g/ml），液层厚度为1cm时的吸收度数值；C为100ml溶液中所含被测物质的重量（按干燥品或无水物计算），g；L为液层厚度，cm。紫外-可见分光光度法是在190~800nm波长范围内测定物质的吸光度，用于鉴别、杂质检查和定量测定的方法。当光穿过被测物质溶液时，物质对光的吸收程度随光的波长不同而变化。因此，通过测定物质在不同波长处的吸光度，并绘制其吸光度与波长的关系图即得被测物质的吸收光谱。从吸收光谱中，可以确定最大吸收波长λmax和最小吸收波长λmin。物质的吸收光谱具有与其结构相关的特征性。因此，可以通过特定波长范围内样品的光谱与对照光谱或对照品光谱的比较，或通过确定最大吸收波长，或通过测量两个特定波长处的吸收比值而鉴别物质。用于定量时，在最大吸收波长处测量一定浓度样品溶液的吸光度，并与一定浓度的对照溶液的吸光度进行比较或采用吸收系数法求算出样品溶液的浓度。原理可见光、紫外线照射某些物质，主要是由于物质分子中价电子能级跃迁对辐射的吸收，而产生化合物的可见紫外吸收光谱。基于物质对光的选择。
在紫外可见分光光度法的定量分析中误差来源有几个方面？如何避免？ 紫外—可见分光光度分析法一、基本要求掌握：本章要求掌握分光光度法的特点、基本原理、测定方法及计算方法；分子吸收光谱与电子跃迁类型，物质对光的选择吸收与吸收光谱曲线，摩尔吸收系数与吸收系数，吸光度与透光度，偏离朗伯-比尔定律的原因；掌握显色反应条件及光度测量条件的选择；掌握紫外—可见分光光度计的主要部件，各部件的作用及仪器原理，主要类型及特点；掌握差示分光光度法的原理、特点.理物质分子结构与紫外吸收光谱的关系，吸收波长位移与分子结构变化的关系；紫外—可见分光光度定量分析影响结果准确度的各种因素.了了解紫外—可见分光光度法测定灵敏度和选择性的途径；双波长分光光度法等其它分光光度法定量测定的方法；紫外—可见分光光度法在有机化合物的结构解析方面的作用及在其他方面的应用.二、基本概念与重点内容A概述1．紫外—可见分光光度法的特点灵敏度与准确度较高；选择性较好；设备简单、操作简便.2．分光光度法的发展过程目视比色法 光电比色法 分光光度法3．分子的紫外—可见吸收光谱分子的紫外—可见吸收光谱是基于物质分子吸收紫外辐射或可见光，其外层电子跃迁而成，又称分子的电子跃迁光谱.紫外—可见分光光度法是基于物质分子的。
紫外可见分光光度法测核酸含量的误差来源是什么？如何排除 误差可能是由于蛋白质污染或者是其他试剂残留所引起的.A260/A280的比值，用于评估样品的纯度，因为蛋白的吸收峰是280nm.纯净的样品，比值大于1.8（DNA）或者2.0（RNA）.如果比值低于1.8 或者2.0，表示存在蛋白质或者酚类物质的影响.A230表示样品中存在一些污染物，如碳水化合物，多肽，苯酚等，较纯净的核酸A260/A230的比值大于2.0.A320检测溶液的混浊度和其他干扰因子.纯样品，A320一般是0.
紫外可见分光光度法，用吸收系数法定量，公式是什么？
分光光度法的误差来源有哪些 分光光度法的误差来源：1）溶液偏离比尔定律引起的误差一方面是溶液中吸光物质不稳定，在测定过程中，被测物质逐渐发生离解、缔合，使被测物质的组成改变产生的误差；另一方面是单色光纯度差引起溶液对比尔定律的偏离，使标准曲线上部发生弯曲，产生误差。2）仪器误差由于仪器不够精密引起的误差，如光源不稳定、光电管灵敏性差、吸收池的厚度不均匀等都会引入误差。3）操作者主观因素引起的误差由于使用仪器不够熟练或操作不当；样品液与标准液的处理没有按相同的条件和步骤进行；读数不够准确等，都属于主观误差。
紫外分光光度法 答：A=ECL，由于没有给出测定吸光度的吸收池长度，默认为1。所以0.434＝141C，由此可以得到浓度C＝0.00308mol/L。所以5片中共含有0.00308*0.250*2.404/0.1502＝0.0123g＝12。
