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RT-PCR检测方法的具体步骤 pcr跑胶胶面溴酚蓝拖尾

2021-03-08知识8

寻采用不同比例的淀粉的发酵液培养枯草芽孢杆菌进行发酵最佳工艺 实验菌种 实验菌种 枯草芽孢杆菌(Bacillus subtillis)1.210;D53、D56:从活性污泥中分离得到。培养基的配制 斜面培养基(营养琼脂):蛋白胨1%,NaC1 0.5 D/0,牛肉膏0。

求一篇血液中提取DNA的文章 我的论文也是做牛的,比你麻烦多了,有DNA的提取,PCR,PCR-SSCP,测序。下面是我的操作方法:第一,冷冻血样于室温解冻。打开水浴锅调温度37℃,打开高速离心机调至4℃,打开制冰机制冰。第二,取500μl血样加入到1.5毫升离心管中,加入等体积PBS液(500μl),置于有盖的装有冰块的冰盒中,翻转冰盒以充分混匀,4℃、12000rpm、离心10min。第三,弃上清,(打散下面的沉淀小块)重复上述步骤中加PBS、离心等,至上清液透明,沉淀呈淡黄色。(一般重复4~5次)第四,加入DNA抽提液500μl,摇匀,使血细胞沉淀与离心管壁分离,37℃水浴1小时。第五,加蛋白酶K5μl(20mg/ml)混匀,55℃过夜至澄清(对未澄清者可补加10μl蛋白酶K混匀,继续消化至澄清)。第六,反应液冷却至室温,加Tris-饱和酚500μl,在有盖的装有冰块的盒中摇匀,混合摇动离心管20 min,使其充分混匀;4℃、12000rpm、离心10min,将上清液用剪去尖头的枪头转入另一个1.5ml的离心管中,重复一次(加Tris-饱和酚500μl,离心)。第七,加氯仿500μl,充分混匀20min,4℃、12000rpm离心10min,将上清液再次转移至另一个1.5ml的离心管中。第八,加氯仿-异戊醇混合液(24:1)500μl混匀20min(以减少反应。

DNA的电泳具体步骤

RT-PCR检测方法的具体步骤如下:(一)RNA提取 1、根据标本数量分装RLT液:从Kit中取出RLT液,用1.5mL离心管分装,每管500μL(在体系配制区操作)。2、在生物安全柜内将。

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原核表达重组蛋白,自己获得的目的基因序列与NCBI上比对,有一处碱基不同,氨基酸序列也是一处不同,在网站上UNIOROT上查到目的蛋白134处氨基酸V-A,而我现在获得的正是。

荧光定量pcr,定量时加完所有试剂后板里的体系怎么混匀

marker电泳条带为什么会这样 跑电泳的62616964757a686964616fe78988e69d8331333363366232时候,也许很多人会羡慕别人的电泳条带清晰好看,自己的电泳条带有时候弥散,有时候歪歪扭扭。熟能生巧,只要你掌握正确操作步骤,你也可以跑得得心应手。清洗玻璃板蘸点洗洁精轻轻擦洗。两面都擦洗过后用自来水冲,再用蒸馏水冲洗干净后立在筐里晾干。若不继续使用,需用无水乙醇擦拭后晾干再妥善收起来,玻璃板之间垫玻璃纸隔开。梳子应用水洗干净,临用前用无水乙醇擦拭晾干。灌胶与上样1.玻璃板对齐后放入夹中卡紧。然后垂直卡在架子上准备灌胶(操作前先往玻璃板间灌水,检查是否漏)。2.按配胶试剂盒说明书选择合适的分离胶浓度配置,最后加入 TEMED,之后摇匀即可灌胶。配制凝胶时要充分混匀,此外应保证试剂的新鲜,特别是过硫酸铵。灌胶时掌握好速度,避免气泡产生(注意浓度越小的胶含水越多,凝固后胶体积缩小越多)。胶上加一层水,液封后的胶凝的更快。灌胶时开始可快一些,胶面快到所需高度时要放慢速度。操作时胶一定要沿玻璃板流下,这样胶中才不会有气泡。加水液封时要很慢,否则胶会被冲变形。未聚合的丙烯酰胺具有神经毒性,操作时应该戴手套防护。梳子插入浓缩胶时,应确保没有气泡。

RT-PCR检测方法的具体步骤如下:(一)RNA提取1、根据标本数量分装RLT液:从Kit中取出32313133353236313431303231363533e58685e5aeb931333337616633RLT液,用1.5mL离心管分装,每管500μL(在体系配制区操作)。2、在生物安全柜内将采样液(鼻拭子、咽拭子、胸水等)或病毒培养物(鸡胚尿囊液或细胞培养液)取100μL加入RLT液管中,充分混匀。3、每管分别加入5μL β-巯基乙醇,混匀后依次加入600μL 70%的乙醇,充分混匀。4、从Kit中取出带滤柱的2mL收集管,打开包装将其做好标记。取步骤(3)中的混合液600μL加入滤柱中,12000rpm,离心15s,弃收集管中的离心液。5、滤柱仍放回收集管上,将步骤(3)剩余的混合液全部吸入滤柱中,12000rpm,离心15s,弃离心液。6、于滤柱中加入700μL Wash Buffer RW1液,12000rpm,离心15s。7、从QIAGEN RNeasy Mini Kit中取一支干净的2mL收集管,将离心后的滤柱移到新的收集管上,于滤柱中加入500μL Wash Buffer RPE液,12000rpm,离心15s。8、弃收集管中的离心液,再于滤柱中加入500μL Wash Buffer RPE液,13000~14000rpm,离心2min。9、将滤柱移到一个干净的1.5mL eppendorf管上,向滤柱中加入30~50μL的Rnase-free Water。

琼脂糖凝胶检测pcr结果胶面变花看不清楚是怎么回事 那要看你的目的基因具体的来源,大小级别的特性。TAE和别的缓冲液什么的,也有些影响,还有就是胶浓度,跑胶时候的电压控制什么的。

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