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胎牛血清技术指标 为什么对动物细胞进行培养时通常要添加血清

2021-03-07知识11

如何区别真假胎牛血清及择取胎牛血清质量 一、外观拿到血清,最先接触的是血清外观,对于缺少细胞培养经验的人来说,外观的判断尤为重要1、颜色根据血红蛋白含量的不同,胎牛血清可表现出黄色或红色,我国的细胞培养用血清标准是不高于20mg/dl,实际上,血红蛋白含量的高低对血清并无直接影响,这个指标的意义在于能体现出采血过程的严谨规范程度,良好的操作能降低血清的溶血。国产血清的采血点很分散,大多是由屠户采血后马上离心收集,所以很少会有溶血,表现出明亮的蜡黄色,当然,国产血清也很少有标准意义上的胎牛血清。进口胎牛血清或多或少总有点溶血,因为真正的胎牛血清凝血功能差,红细胞容易破裂。总的来说,国产的血清呈现出蜡黄。进口的血清,质量最好的呈现出谈黄、微红色,差点的呈现出橘红色或鲜红色。当然,热灭活血清或保存不当的血清,由于血红蛋白的破坏氧化,会呈现出暗红,甚至咖啡色。2、沉淀很多血清客户,会发现进口血清有沉淀,从而怀疑血清的质量问题,这是没有根据的。血清中的沉淀是由纤维蛋白的凝聚产生,对血清质量没有任何影响,沉淀的产生原因很多,和厂家的加工生产方式密切相关。国产的血清,大多来自北方,由于价格低廉,保存环境都不好,从采血、冷冻、运输到生产。

抗原抗体反应的应用 (1)抗原:免疫动物是制备抗血清的第—步。免疫所用的抗原可用病毒、细菌或者其他蛋白质抗原,如果使用半抗原如小分子激素等,必须与大分子载体连接。抗原的用量视抗原种类及动物而异,—次注射小鼠可以少至几个微克,免、羊甚至更大的动物每次注射的量就相应增加,从几百μg/次至几mg/次。〔2)佐剂及乳化:佐剂可以帮助抗原在注射部位缓慢释放,以增加免疫刺激的效果。佐剂有完全和不完全佐剂之分。完全佐剂加有灭活的分枝杆菌(如卡介苗)或棒状杆菌。福氏佐剂可从试剂公司购买,也可用羊毛脂和石蜡油按1:2—4混合自行制备。佐剂与抗原按1:1的比例混合乳化为均匀的乳液,放置后不会发生油水分离。(3)免疫动物:常用于制备抗血清的动物打豚鼠、家免、小鼠、大鼠等,如果大量生产可用动物羊、马等,动物接受免疫的乳液量小鼠为1.0—2.0 mL,家兔为2—4mL。抗原免疫动物的途径取决于动物种类、抗原特性和是否使用佐剂。腹腔注射(i.p),肌肉注射(i.m),皮内注射(i.d.)和皮下注射(s.c.)适合于任何抗原,这些途径主要刺激局部淋巴结发生免疫应答,初次免疫和免疫加强注射均可使用。静脉注射(i.v.)则只适合于可溶性抗原及分散的单细胞悬液,且不能。

如何防止细胞培养出现污染 最低0.27元/天开通文库会员,可在文库查看完整内容>;原发布者:桔子与石头细胞培养(四)暨南大学医学院生物化学教研室费嘉(一)培养细胞污染的判定与排除?污染的定义-按现代的观念,凡是混入培养环境中对细胞生存产生有害的成分和造成细胞不纯的异物都应该视为污染。污染物的种类微生物(真菌、细菌、病毒和支原体)化学物质(影响细胞生存、非细胞所需的化学成分)细胞(非同种的其他细胞)?污染途径1空气:空气是微生物及尘埃颗粒传播的主要途径。培养设施不能设在通风场所。无菌操作应在净化台内进行,工作时要带口罩,以免因讲话、咳嗽等使外界污染进入操作面,造成污染。超净工作台2器材:各种培养器皿、器械消毒不彻底和洗刷不干净导致污染,另外需要对培养箱进行定期消毒,防止形成污染3操作:o实验操作无菌观念不强o技术不熟练o使用污染的器皿或封瓶不严o培养两种以上细胞时,操作不规范,交叉使用吸管或培养液、培养瓶等导致细胞交叉污染。4血清:有些血清在生产时就已经被支原体或病毒等污染。5组织样本:原代培养的污染多数来源于组织样本;取材时碘酒消毒后脱碘不彻底,可造成碘混入组织、细胞或培养液中,影响细胞细胞生长。污染对培养细胞的影响及污染的。

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