革兰氏染色需要注意哪些问题 为什么 1.选用活跃生长期菌种染色，老龄的革兰氏阳性细菌会被染成红色而造成假阴性。2.涂片不宜过厚，以免脱色不完全造成假阳性。3.脱色是革兰氏染色是否成功的关键，脱色不够造成假阳性，脱色过度造成假阴性。
问答题，抗酸染色的操作步骤与结果判断。 抗酸染色2113的原理：分枝杆菌的细胞壁内5261含有大量的脂质，主要4102是分枝菌酸，它包围在肽聚1653糖的外面，所以分枝杆菌一般不易着色，要经过加热和延长染色时间来促使其着色。但分枝杆菌中的分枝菌酸与染料结合后，就很难被酸性脱色剂脱色，故名抗酸染色。抗酸染色一般步骤（不同厂家出产的试剂盒会有不同，可见说明书）1）初染用玻片夹夹持涂片标本，滴加石炭酸复红2-3滴，在火焰高处徐徐加热，切勿沸腾，出现蒸汽即暂时离开，若染液蒸发减少，应再加染液，以免干涸，加热3-5分钟，待标本冷却后用水冲洗。2）脱色3%盐酸酒精脱色30秒~1分钟；用水冲洗。3）复染用碱性美兰溶液复染1分钟，水洗，用吸水纸吸干后用油镜观察。经过抗酸染色，分枝杆菌为红色，而其他细菌及背景中的物质为蓝色。
试述革兰染色法的步骤，结果及其临床意义 一般包括初染、媒染、脱色、复染等四个步骤，具体操作方法是：1）涂片固定.2）草酸铵结晶紫染1分钟.3）自来水冲洗.4）加碘液覆盖涂面染约1分钟.5）水洗，用吸水纸吸去水分.6）加95%酒精数滴，并轻轻摇动进行脱色，20秒后水洗，吸去水分.7）蕃红染色液（稀）染1分钟后，自来水冲洗.干燥，镜检.具体试验 流程1、取载玻片用纱布擦干，载玻片的一面用marker笔画一个小圈（用来大致确定菌液滴的位置）.涂菌的部位在火焰上烤一下，除去油脂.2、涂片：液体培养基：左手持菌液试管，在酒精灯火焰附近5cm左右打开管盖；右手持接种环在火焰中烧灼灭菌，等冷却后从试管中沾取菌液一环，在洁净无脂的载玻片上涂直径2mm左右的涂膜，最后将接种环在火焰上烧灼灭菌.固体培养基：先在载玻片上滴一滴无菌水，再用接种环取少量菌体，涂在载玻片上，使其薄而均匀.3、晾干：让涂片在空气中自然干燥.4、固定：让菌膜朝上，通过火焰2-3次固定（以不烫手为宜）.5、染色：将固定过的涂片放报纸上，滴加草酸铵结晶紫液，染1min.6、水洗：用水缓慢冲洗涂片上的染色液，用吸水纸吸干.简单染色结束可观察细胞形态.7、媒染：滴加1滴碘液，染1min，水洗.8、脱色：吸去残留水，连续滴加95%乙醇脱色20-30s至流出液无紫色，立即水洗.9。
