紫外分光光度法测维生素 为何不直接以紫外可见分光光度法测定维生素A的含量,而要采用较为繁琐的三点校正法

用紫外分光光度法测定维生素A含量时，为什么采用三点校正法 核酸、核苷酸及其衍物结构嘌呤、嘧啶碱基具共轭双健系统（－C＝CC＝C），能够强烈吸收250~280nm 波紫外光.核酸（DNA，RNA）紫外吸收值260nm 处.遵照Lambert-Beer 定律，紫外光吸收值变化测定核酸物质含量.同pH 溶液嘌呤、嘧啶碱基互变异构情况同，紫外吸收光随表现明显差异，摩尔消光系数随同.所，测定核酸物质均应固定pH溶液进行.核酸摩尔消光系数（或吸收系数），通ε（ρ）表示，即每升含摩尔核酸磷溶液260nm 波处消光值（即光密度，或称光吸收）.核酸摩尔消光系数数，依赖于材料前处理、溶液pH 离强度发变化.经典数值（pH=7.0）：DNA ε（ρ）=6 000 8 000RNA ε（ρ）=7 000 10 000牛胸腺DNA 钠盐溶液（pH=7.0）ε（ρ）=6 600，DNA 含磷量9.2%，含1μg/mL DNA 钠盐溶液光密度0.020.RNA 溶液（pH=7.0）ε（ρ）=7 700~7 800，RNA 含磷量9.5%，含1μg/mL RNA 溶液光密度0.022~0.024.采用紫外光光度测定核酸含量，通规定：260nm 波，浓度1μg/mL DNA 溶液其光密度0.020，浓度1μg/mL RNA 溶液其光密度0.024.，测定未知浓度DNA（RNA）溶液光密度OD260nm，即计算测其核酸含量.该简单、快速、灵敏度高，核酸3μg／mL 含量即测.于含微量蛋白质核苷酸等吸收紫外光物质核酸品，测定误差。如何提高紫外分光光度法测定维生素b12的含量 所有的分光光度计的操作都差不多，就那几步：1.开机预热30分钟，以保证读数稳定，手动或软件将测量数值显示模式选为透射比或吸光度。2.如果测紫外光谱或紫外吸收度，手动方式将光源选择杠杆调到氘灯，自动方式通过软件选择氘灯即可，测可见光谱选择卤钨灯作为光源。3.根据被测物质的操作规程，手动或软件选择单色光的波长。4.关闭光门，手动或软件调0使读数为0%（透射比模式）或无穷大（吸光度模式）。5.为何不直接以紫外可见分光光度法测定维生素A的含量，而要采用较为繁琐的三点校正法 因为维生素A原料中常常混有许多杂质，包括异构体，氧化降解产物，合成中间体，副产物等有关物质，且含有稀释用油，这些杂质在紫外区也有吸收，导致在维生素A最大吸收波长处测得的吸光度并不是维生素A独有的吸收，为了消除其他物质引起的误差，所以采用三点校正法。这三点波长的选择原则是这样的：一点选在维生素A的最大吸收波长处，其他的两点各在这一波长两侧选一点。这两点有两种选择方法，第一种是等波长差法，即最大吸收波长为328nm，左侧一点为316nm，右侧一点为340nm.这是10版药典规定测定维生素A醋酸酯的方法。第二种方法是等吸收比法，即左右两波长处的吸光度相等等于最大吸收波长处吸光度的七分之六。10版药典规定测定维生素A醇时用此方法。

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