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紫外分光光度计254nm 紫外光吸收法测定蛋白质浓度时,为什么要同时测定280nm及260nm的吸光度

2021-03-06知识12

紫外分光光度计与紫外可见分光光度计的区别是什么? 紫外2113分光光度计与紫外可见分光光度计的区别:52611、测量4102的范围不同:(1)紫外分1653光光度计量程为200nm~600nm间(包括部分可见光)。(2)紫外可见分光光度计量程为200nm~1000nm。2、所用灯不同:(1)紫外光区通常用氢灯或氘灯。(2)见光区通常用钨灯或卤钨灯。3、原理不同:(1)紫外分光光度计,就是根据物质的吸收光谱研究物质的成分、结构和物质间相互作用的有效手段。(2)紫外-可见分光光度计是基于紫外可见分光光度法原理,利用物质分子对紫外可见光谱区的辐射吸收来进行分析的一种分析仪器。扩展资料紫外-可见分光光度计的结构与功能:由光源、单色器、吸收池、检测器和信号显示系统五大部分组成。(1)光源:是提供符合要求的入射光的装置,有热辐射光源和气体放电光源两类。热辐射光源用于可见光区,一般为钨灯和卤钨灯,波长范围是350~1000nm;气体放电光源用于紫外光区,一般为氢灯和氘灯,连续波长范围是180~360nm。(2)单色器:功能是将光源产生的复合光分解为单色光和分出所需的单色光束,它是分光光度计的心脏部分。(3)吸收池:又称比色皿,供盛放试液进行吸光度测量之用,其底及两侧为毛玻璃,另两面为光学透光面,为减少光。

紫外光吸收法测定蛋白质浓度时,为什么要同时测定280nm及260nm的吸光度 紫外吸收检测2113DNA浓度与纯度2007年11月13日5261 星期二 11:40目的:了解紫外吸收检测DNA浓度与纯4102度的原理,掌握测定方法.原理:1653 核酸的最大吸收波长为260nm,蛋白质为280nm,在波长260nm时,1OD值相当于双链DNA浓度为50μg/ml,单链 寡核苷酸的含量为30μg/ml,可以据此来计算核酸样品的浓度,还可通过测定在260nm和280nm的OD值的比值(OD260/OD280),估计核酸的纯度.纯净DNA的比值为1.8,RNA为2.0.若比值高于1.8说明DNA样品中的RNA尚未除 尽,若样品中含有酚和蛋白质将导致比值降低.270nm存在高吸收表明有酚的干扰.紫外分光光度法只能用于测定浓度 大于0.25μg/ml的核酸溶液,对浓度更小的样品,可采用荧光分光光度法.试剂与仪器:提取的质粒DNA,紫外分光光度仪.操作步骤:1)分光光度计先用水在260nm和280nm两个波长下校零.2)取质粒DNA样品2μl,用水稀释100倍,转入分光光度计的石英比色杯中.3)在260nm和280nm分别读出样品光密度值.如果样品浓度单位为μg/μl,则样品DNA浓度为OD 值的10倍,即如 OD260=0.1,则样品浓度即为1μg/μl.4)若OD260/OD280大于1.8,说明仍有RNA,可以考虑用RNA酶处理样品,若小于1.8,说 明样品中含有蛋白质或酚,应再用酚/氯仿抽提,以乙醇沉淀纯化。

紫外分光光度计里的OD280 OD260 OD254 OD190这几个波长在生物学里分别是测什么的 OD260是测核酸,1个OD260值相当2113于40μg/mLRNA或50μg/mLDNA。OD280 是测蛋白的,芳香5261族氨基酸在280nm处有紫外吸收,4102在0.1-1mg/ml范围内,蛋白含量与吸1653光度成正比(这样测出的为估计值)。OD230测盐浓度,小分子等各种比值反应纯度,纯的DNA OD260/OD280≈1.8,小的话有蛋白污染,大的话有RNA污染;纯的RNA OD260/OD280≈2.0;OD260/OD230应大于2,OD260/OD230说明去盐不充分。OD254 可测总有机碳(TOC)、溶解性有机碳(DOC),以及三卤甲烷(THMs)的前驱物OD190 好像被用作ELISA里面检测

我用紫外可见分光光度计测得番红花苷含量为254%,怎么会超过100%呢? 请仔细检查实验设备、实验材料,以及整个实验过程,找出可能出现的误差,然后从新再做一次

7600紫外分光光度计,我设置的测量区间为200nm-800nm,用于测量415nm时的黄酮吸光度 紫外可见分光光度计定量测定校零后还要测定空白对照的吸光度吗紫外-可见分光光度法是在190~800nm波长范围内测定物质的吸光度,用于鉴别、杂质检查和定量测定的方法。当光穿过被测物质溶液时,物质对光的吸收程度随光的波长不同而变化。因此,通过测定物质在不同波长处的吸光度,并绘制其吸光度与波长的关系图即得被测物质的吸收光谱。从吸收光谱中,可以确定最大吸收波长λmax和最小吸收波长λmin。物质的吸收光谱具有与其结构相关的特征性。因此,可以通过特定波长范围内样品的光谱与对照光谱或对照品光谱的比较,或通过确定最大吸收波长,或通过测量两个特定波长处的吸收比值而鉴别物质。用于定量时,在最大吸收波长处测量一定浓度样品溶液的吸光度,并与一定浓度的对照溶液的吸光度进行比较或采用吸收系数法求算出样品溶液的浓度

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可见分光光度计与紫外分光光度计有什么区别?以及各种部件的区别? 区别:1、可见分光光度2113法事基于物质对可见光的吸5261收4102,紫外是基于物质对紫外光的吸收而的1653。2、光源不同:可见用钨丝灯,紫外用氘灯。3、吸收池不同:可见的吸收池由玻璃制成,紫外的由玻璃制成。4、紫外可见分光光度计测量的范围大些,由于各种不同光波发射的灯管不同,紫外和可见光所用就不同。一般紫外分光光度计量程在200nm->;500~600nm间(包括部分可见光);可见分光光度计在340nm~1000nm;紫外可见分光光度计就可以调节200nm~1000nm了。扩展资料1、分光光度分析就是根据物质的吸收光谱研究物质的成分、结构和物质间相互作用的有效手段。它是带状光谱,反映了分子中某些基团的信息。可以用标准光图谱再结合其它手段进行定性分析。2、紫外分光光度计,就是根据物质的吸收光谱研究物质的成分、结构和物质间相互作用的有效手段。紫外分光光度计可以在紫外可见光区任意选择不同波长的光。3、物质的吸收光谱就是物质中的分子和原子吸收了入射光中的某些特定波长的光能量,相应地发生了分子振动能级跃迁和电子能级跃迁的结果。由于各种物质具有各自不同的分子、原子和不同的分子空间结构,其吸收光能量的情况也就不会相同,因此,每种物质就有其特有的、。

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