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rtpcr看家基因 做RT-PCR内参的作用是什么?应该如何选择管家基因

2021-03-05知识17

western 抗体选择请问做细菌的某基因的表达量,比如csgD,RT-PCR后,用western 验证,1.那我抗体的选择有什么要注意的吗?2.我要选CsgD这个蛋白的特异性一抗吗?如果没有怎么办?

real time PCR看家基因的选择重要吗

rt-pcr可以定量检测基因吗 方法采用竞争性RT-PCR定量检测基因启动子活性的方法,研究染色质模板的体外组装,并比较染色质模板与裸露DNA模板上基因的转录活性。

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RT-PCR 看家基因(HGAPDH)循环数问题 RT-PCR看家基因(HGAPDH)循环数问题最近一直在做RT-PCR用的看家基因是HGAPDH。但做出来的CYCLENUMBER数值总是出现波动,有时候是14?

做RT-PCR的时候为什么要设置标准反应体系和管家基因反应体系?还有就就是,为什么要制备用于绘制梯度稀释标准曲线的DNA模板?这些步骤在实验中有什么作用?

RT-PCR的原理是什么?有何用途? 原理是:提取组织或细胞中的总RNA,以其中的mRNA作为模板,采用Oligo(dT)或随机引物利用逆转录酶反转录成cDNA。再以cDNA为模板进行PCR扩增,而获得目的基因或检测基因表达。该技术主要用于:分析基因的转录产物、获取目的基因、合成cDNA探针、构建RNA高效转录系统。RT-PCR(Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction)即逆转录PCR,是将RNA的反转录(RT)和cDNA的聚合酶链式扩增(PCR)相结合的技术。首先经反转录酶的作用从RNA合成 cDNA,再以cDNA为模板,扩增合成目的片段。RT-PCR技术灵敏而且用途广泛,可用于检测细胞中基因表达水平,细胞中RNA病毒的含量和直接克隆特定基因的cDNA序列。作为模板的RNA可以是总RNA、mRNA或体外转录的RNA产物。无论使用何种RNA,关键是确保RNA中无RNA酶和基因组 DNA的污染。用于反转录的引物可视实验的具体情况选择随机引物、Oligo dT 及基因特异性引物中的一种。对于短的不具有发卡结构的真核细胞mRNA,三种都可。扩展资料反转录酶的选择1、Money 鼠白血病病毒(MMLV)反转录酶:有强的聚合酶活性,RNA酶H活性相对较弱。最适作用温度为37℃。2、禽成髓细胞瘤病毒(AMV)反转录酶:有强的聚合酶活性和RNA酶H活性。最适。

做RT-PCR内参的作用是什么?应该如何选择管家基因 你说的应该是real time PCR吧,注意RT其实是逆转录reverse transcription的缩写,和real time一定要分开来。常说的qPCR,qRT-PCR,都是通过实时(real time)的方法,测定。

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