工业上碱性蛋白酶的分离纯化 为什么分离与纯化胃蛋白酶要用碱性溶液？

胞外蛋白酶的分离纯化、理化特性及其基因克隆 近年来，从木霉菌中分离到多种胞外蛋白酶，多为丝氨酸蛋白酶和天冬氨酸蛋白酶（表10.12）。蛋白酶分子量范围为21～45kDa，大小不等。不同木霉菌株可以产生分子量、氨基酸序列和核酸序列类似的蛋白酶。Geremia等（1993）从黄绿木霉中分离纯化到1个与枯草杆菌素类似的碱性丝氨酸蛋白酶PRB1，类似的蛋白酶在哈茨木霉中也被分离到。另外1个胰蛋白酶类似的丝氨酸蛋白酶PRA1从哈茨木霉和绿色木霉中被纯化得到，而且PRA1被证实有杀线虫的功效，能明显降低南方根结线虫卵的孵化率（Suarez et al.，2005）。里氏木霉在添加纤维素酶诱导剂的情况下可分泌酸性天冬氨酸蛋白酶。另有报道一种pH值依赖的天冬氨酸蛋白酶从绿色木霉中被分离到（Suarez et al.，2005）。表10.12 不同木霉菌株来源的胞外蛋白酶及蛋白酶基因续表注：N.R.为未发现。在过去几年，随着人们对木霉蛋白水解系统遗传背景研究的关注，部分木霉蛋白酶基因陆续被克隆出来。基因 prb1是最早被克隆到的木霉蛋白酶基因，编码丝氨酸蛋白酶PRB1，对其启动子分析结果显示prb1含有与氮、碳调节分别相关联的AreA和CreA位点，以及4个重寄生应答元素位点（mycoparasitic response elements，MYREs）（Geremia et al.，1993）。。蛋白质的酸碱性苏教版课本说：“蛋白质分离纯化过程中酸性蛋白可以用稀碱性溶液抽提”我想查一下什么叫酸性蛋白，有人说等电点偏酸性的为酸性蛋白，举例为胃蛋白酶，但我查了一下胃蛋白酶等电点8.1，偏碱性呀，到底咋回事？ 怎么判断蛋白酶是酸性中性还是碱性 水解蛋白质肽2113键的一类酶的5261总称。按其水解多肽的方式，可以将4102其分为内肽酶和外1653肽酶两类。内肽酶将蛋白质分子内部切断，形成分子量较小的月示和胨。外肽酶从蛋白质分子的游离氨基或羧基的末端逐个将肽键水解，而游离出氨基酸，前者为氨基肽酶后者为羧基肽酶。按其活性中心和最适pH值，又可将蛋白酶分为丝氨酸蛋白酶、巯基蛋白酶、金属蛋白酶和酸性蛋白酶。按其反应的最适pH值，分为酸性蛋白酶、中性蛋白酶和碱性蛋白酶。工业生产上应用的蛋白酶，主要是内肽酶。蛋白酶广泛存在于动物内脏、植物茎叶、果实和微生物中。微生物蛋白酶，主要由霉菌、细菌，其次由酵母、放线菌生产。催化蛋白质水解的酶类。种类很多，重要的有胃蛋白酶、胰蛋白酶、组织蛋白酶、木瓜蛋白酶和枯草杆菌蛋白酶等。蛋白酶对所作用的反应底物有严格的选择性，一种蛋白酶仅能作用于蛋白质分子中一定的肽键，如胰蛋白酶催化水解碱性氨基酸所形成的肽键。蛋白酶分布广，主要存在于人和动物消化道中，在植物和微生物中含量丰富。由于动植物资源有限，工业上生产蛋白酶制剂主要利用枯草杆菌、栖土曲霉等微生物发酵制备。蛋白酶已广泛应用在皮革、毛皮、丝绸、医药、食品、酿造等方面。。如何分离产生碱性蛋白酶的芽孢杆菌 一.先配制以蛋白质为唯一氮源和碳源的固体琼脂培养基.二.（首先要明白两点：1、—NH2能够水解，与H2O反应生成—NH3＋和OH－，从而显示出碱性；2、—COOH能够电离，在水中生成—COO－和H＋，从而显示出酸性；3、氨基酸分之上，必须至少带有一个—COOH和一个—NH2明白以上几点就能够判断了要使其能够带正电，水解和电离后，总的来说氨基酸上的—NH3＋要多于—COO－，而生成一个—NH3＋就要得到一个OH－，生成一个—COO－就要得到一个H＋，因此得到的OH－要比H+多，因而显示出碱性；相反，要是带负电的话，那么就显示出酸性.）三.由上可知加入酚酞（或石蕊）等酸碱指示剂.四.加入土壤浸出液，出现红色圈的为蛋白质水解酶产生菌.五.用平板划线法或稀释涂布平板法分离纯化，即可得较纯种目的菌株.