紫外光吸收法测定蛋白质浓度时，为什么要同时测定280nm及260nm的吸光度 紫外吸收检测2113DNA浓度与纯度2007年11月13日5261 星期二 11：40目的：了解紫外吸收检测DNA浓度与纯4102度的原理，掌握测定方法.原理：1653 核酸的最大吸收波长为260nm，蛋白质为280nm，在波长260nm时，1OD值相当于双链DNA浓度为50μg/ml，单链 寡核苷酸的含量为30μg/ml，可以据此来计算核酸样品的浓度，还可通过测定在260nm和280nm的OD值的比值（OD260/OD280），估计核酸的纯度.纯净DNA的比值为1.8，RNA为2.0.若比值高于1.8说明DNA样品中的RNA尚未除 尽，若样品中含有酚和蛋白质将导致比值降低.270nm存在高吸收表明有酚的干扰.紫外分光光度法只能用于测定浓度 大于0.25μg/ml的核酸溶液，对浓度更小的样品，可采用荧光分光光度法.试剂与仪器：提取的质粒DNA，紫外分光光度仪.操作步骤：1)分光光度计先用水在260nm和280nm两个波长下校零.2)取质粒DNA样品2μl，用水稀释100倍，转入分光光度计的石英比色杯中.3)在260nm和280nm分别读出样品光密度值.如果样品浓度单位为μg/μl，则样品DNA浓度为OD 值的10倍，即如 OD260=0.1，则样品浓度即为1μg/μl.4)若OD260/OD280大于1.8，说明仍有RNA，可以考虑用RNA酶处理样品，若小于1.8，说 明样品中含有蛋白质或酚，应再用酚/氯仿抽提，以乙醇沉淀纯化。
紫外分光光度法测定蛋白质含量实验报告
我们测蛋白质溶解度用的是紫外分光光度法，可以不用标准蛋白么 是测溶液蛋白质浓度吧。必须要有标准曲线。你得知道你的蛋白的epsilon值，就是extinction coefficient。如果你有该蛋白的标准曲线，你就可以直接根据紫外读数，对照标准曲线对应出蛋白浓度，如果没有的话，只能读出样品的紫外吸光值，对照其他已知extinction coefficient的蛋白的标准曲线，然后查你的蛋白的extinction coefficient，然后除以这个coefficient得出浓度。我们现在通常用Nano Drop测蛋白浓度，程序里有一个自带的extinction coefficient为1的蛋白的标准曲线，所以只要把测得的浓度除以你的蛋白实际的extinction coefficient就可以了，很方便。
紫外分光光度法测量蛋白质的含量的原理？ 1紫外吸收光谱是基于物质的生色团和助色团的特性对紫外光谱的吸收，可用于物质的鉴定和结构分析.2参与蛋白质组成的20种氨基酸中色氨酸(Trp)、酪氨酸(Tyr)和苯丙氨酸(Phe)的R基团中含有苯环共轭双键系统，在紫外光区（2.
