碱性蛋白酶产生菌的分离筛选 胞外蛋白酶的分离纯化、理化特性及其基因克隆

从土壤中分离纯化碱性蛋白酶牙孢杆菌的步骤是什么 该菌的最适产酶时间为48-60h，最适产酶pH位为11．0，最适产酶温度为30-35℃．该菌对氨苄青霉素和硫酸链霉素敏感，而对壮观霉素有抗性 分离可用调节pH值，温度以及用。胞外蛋白酶的分离纯化、理化特性及其基因克隆 近年来，从木霉菌中分离到多种胞外蛋白酶，多为丝氨酸蛋白酶和天冬氨酸蛋白酶（表10.12）。蛋白酶分子量范围为21～45kDa，大小不等。不同木霉菌株可以产生分子量、氨基酸序列和核酸序列类似的蛋白酶。Geremia等（1993）从黄绿木霉中分离纯化到1个与枯草杆菌素类似的碱性丝氨酸蛋白酶PRB1，类似的蛋白酶在哈茨木霉中也被分离到。另外1个胰蛋白酶类似的丝氨酸蛋白酶PRA1从哈茨木霉和绿色木霉中被纯化得到，而且PRA1被证实有杀线虫的功效，能明显降低南方根结线虫卵的孵化率（Suarez et al.，2005）。里氏木霉在添加纤维素酶诱导剂的情况下可分泌酸性天冬氨酸蛋白酶。另有报道一种pH值依赖的天冬氨酸蛋白酶从绿色木霉中被分离到（Suarez et al.，2005）。表10.12 不同木霉菌株来源的胞外蛋白酶及蛋白酶基因续表注：N.R.为未发现。在过去几年，随着人们对木霉蛋白水解系统遗传背景研究的关注，部分木霉蛋白酶基因陆续被克隆出来。基因 prb1是最早被克隆到的木霉蛋白酶基因，编码丝氨酸蛋白酶PRB1，对其启动子分析结果显示prb1含有与氮、碳调节分别相关联的AreA和CreA位点，以及4个重寄生应答元素位点（mycoparasitic response elements，MYREs）（Geremia et al.，1993）。。产生蛋白酶的微生物 分离 本论文主要研究了以大豆废渣为原料制备风味良好的大豆多肽的问题.摒弃了常规的酸法、碱法和一般的酶解方法，采用自行选育的微生物蛋白酶结合木瓜蛋白酶和胰蛋白酶多酶协同作用，制备水解度高、风味良好的大豆多肽.实验从我国传统发酵食品豆腐乳出发，筛选到一株所产微生物蛋白酶对大豆蛋白有一定降解能力，同时能够消除内切酶水解大豆蛋白后产生不良风味的菌株，命名为MY10.对MY10进行了初步鉴定，发现其为毛霉属.研究了菌体生长和产酶特性的关系，发现该菌株在液体培养基中84h时达到最大，培养基的pH值在0～48h不断下降，48h时pH值为4.2，之后pH值开始回升，84h后为7.0以上，通过测定蛋白酶活性，发现MY10所产蛋白酶在84h活性达到最大；对粗酶液进行了分离纯化，首先确定了用60%的饱和(NH_4)_2SO_4进行沉淀，然后过Sephadex G75，通过蛋白酶活性的测定，发现可能含有中性蛋白酶和碱性蛋白酶；对粗酶液性质进行了研究，发现该酶系的最适pH值为9.2，中性、碱性蛋白酶的最适温度分别为60℃、50℃.由于该酶系的蛋白酶活性不是很高，为了提高豆粕的水解度，得到水解程度较高的大豆多肽，本论文选用木瓜蛋.英文摘要：The problem of producing flavorful polypeptides from soybean residue was discussed 。DNA指纹技术应用了什么原理？ DNA指纹技术原理：一般要通过以下几点来完成：1、将送检的各种生物学检样，如毛发、血痕、精斑、人体组织或白骨等，把其中所含的DNA 提取出来。2、选用与探针配对的限制性。