小鼠腹腔巨噬细胞吞 噬功能检测方法

巨噬细胞功能的检测方法有哪些？ 常用的检测方法有以下几种：（一）炭粒廓清试验（二）吞噬功能的检测（三）巨噬细胞溶酶体酶的测定（四）巨噬细胞促凝血活性测定（五）巨噬细胞表面受体的检测流式细胞术检测细胞吞噬能力的方法有什么优点 流式细胞术检测小鼠腹腔巨噬细胞吞噬能力巨噬细胞是固有免疫系统的重要成员，具有吞噬、清除及呈递抗原异物的生物学功能，是维持机体的正常生理状态所必需的。传统的显微镜镜检记数法检测巨噬细胞吞噬能力存在主观性强、重复性差及耗时长等缺点，影响实验结果的客观性与准确性。流式细胞仪技术用于巨噬细胞的吞噬率检测可以轻易地将观察细胞数从几百上升至几千，而且具有分析速度快、重复性好和特异性强等优点。荧光微球被细胞吞噬后，其荧光信号可迅速被流式细胞仪检测，具有荧光信号的巨噬细胞即视为出现吞噬现象，可 快速、准 确地测 定 巨噬细胞 的吞 噬率。《保健食品检验与评价技术规范增强免疫力功能评价方法(征求意见稿)》中要求用小鼠腹腔巨噬细胞吞噬荧光微球试验替代巨噬细胞吞噬鸡红细胞实验》，本研究的主要 目的是在征求意见稿的基础上，摸索最佳实验条件，从而使该方法能灵敏稳定的反映小鼠腹腔单核一 巨噬细胞吞噬能力。本文利用流式细胞术检测小鼠腹腔巨噬细胞吞噬荧光微球能力试验方法的灵敏性、稳定性以及易操作性，结果发现：小鼠腹腔巨噬细胞浓度调整为1*10E5~2*10E5/ml，孵育1h，1×10E7／孔微球浓度可使实验快速而又精确地反映巨噬细胞的。免疫细胞分类及分离方法？ 免疫细胞（immune cell）主要是指能识别抗原，产生特异性免疫应答的淋巴细胞等。淋巴细胞是免疫系统的基本成分，在体内分布很广泛泛，主要是T、B淋巴细胞受抗原刺激而被活化（activation），分裂增殖、发生特异性免疫应答。除T淋巴细胞和B淋巴细胞外，还有K淋巴细胞和NK淋巴细胞，共四种类型。T淋巴细胞是一个多功能的细胞群。除淋巴细胞外，参与免疫应答的细胞还有浆细胞、粒细胞、肥大细胞、抗原呈递细胞及单该吞噬细胞系统的细胞。免疫细胞分离技术1、淋巴细胞的分离取肝素抗凝血1m1 加Hanks 液1m1 稀释后，沿管壁徐徐滴流叠加盛有2m1 淋巴细胞分离液的试管内(注意勿与分离液混合，然后2000r／min 水平离心20min，管内分为4 层，自上而下依次为血浆，单个核细胞，颗粒白细胞、红细胞(图2—1)。用毛细管伸至单个核细胞层中(位于细胞分离液与血浆的界面上)，沿管壁轻轻吸出全部细胞。然后用Hanks 液洗两次，每次2000r／min 离心10min，最后用RPMI l640 培养液将细胞配成2×106／m1 的细胞悬液备用。2、T 细胞及B 细胞的分离将淋巴细胞悬液通过尼龙棉柱，B 细胞粘附于尼龙棉上，T细胞则不粘附，先用RPMI l640 培基洗脱尼龙棉柱，流下的细胞悬液含有丰富的T 细胞。然后用力。简述T细胞功能测定的常用方法 免疫学检测方法可分为体液免疫和细胞免疫测定。1．体液免疫测定主要利用抗原与相应抗体在体外发生特异性结合，并在一些辅助因子参与下出现反应，从而用已知抗原或抗体来测知未知抗体或抗原。此外，尚包括检测体液中的各种可溶性免疫分子，如补体、免疫球蛋白、循环复合物、溶菌酶等。2．细胞免疫测定法是根据各种免疫细胞（T细胞、B细胞、K细胞、NK细胞及巨噬细胞等）表面所具有的独特标志和产生的细胞因子等，测定各种免疫细胞及其亚群的数量和功能，以帮助了解机体的细胞免疫水平。体液免疫检测法1.凝集反应。颗粒性抗原（细菌或红细胞等）与相应抗体特异性结合，在电解质参与下形成肉眼可见的凝集物，称之为凝集反应。1）直接凝集反应。颗粒性抗原与相应抗体直接结合所产生的凝集现象，前者多为细胞表面的结构成分，如细菌或红细胞的表面结构抗原。⑴玻片法：多用于抗原的定性检测。⑵试管法：多用于抗体的定量检测。2）间接凝集反应。将可溶性抗原吸附于载体颗粒（如乳胶颗粒、红细胞等）的表面，称之为致敏颗粒。当致敏颗粒与相应抗体结合，即可出现凝集现象。这个反应常用于测定细菌性抗体、病毒性抗体、钩端螺旋体和梅毒螺旋体抗体及某些自身抗体（如抗核抗体。用什么生物学方法可以检测小鼠的巨噬细胞，T/B淋巴细胞的功能？注：小鼠用了中草药免疫增强剂 可以参考http：//wenku.baidu.com/view/3a2602d9d15abe23482f4dad.html还有下面两个方法也可以参考下：巨噬细胞：鸡血细胞吞噬实验。小鼠腹腔注射1％鸡血0.5~1ml，活动30～60min。小鼠断颈处死后，注射Hank’s液3～4ml吹匀，取腹水细胞涂片。直接观察或干燥后瑞氏染料染色，镜检。T淋巴细胞：活性E花环试验。活性E花环试验反映的是对SRBC（绵羊红细胞）具有高度亲和力的T细胞亚群，该亚群T细胞与T细胞的体内外功能活性有密切关系，在一定程度上反映机体细胞免疫功能。淋巴细胞悬液0.1ml、1%SRBC 0.1ml和吸收处理FCS 0.1ml混匀，500rpm离心30’’，置37℃水浴20～30min。加0.8%戊二醛1滴，轻轻转动离心管混匀固定2～3min，再滴一滴瑞氏染色5min后，镜检。做腹腔镜手术前都需要做什么检查？ 刚到医院确诊了子宫肌瘤，准备做腹腔镜手术，挂号处说要提前一周去做术前检查，不知是要做哪些检查，因为我对这个也不是很了解，就来问一下，这个要做哪些术前检查？小鼠巨噬细胞的实验为什么要注入淀粉牛肉汤巨噬细胞也建有无限细胞系，大多来自小鼠，如P338D1、S774A.1、RAW309Cr.l等，均获恶性，培养中呈巨噬细胞形态和吞噬功能，易于传代和瓶壁分离，但难以建株。培养巨噬细胞可用各样方法和各种来源来获取细胞，以小鼠腹腔取材法最为实用，其法如下：1、实验前三天，向每只小鼠腹腔内注入无菌硫羟乙酸肉汤1ml（勿注入肠内）。2、引颈杀死动物，手提鼠尾将全鼠浸入70%酒精中3～5秒。3、置动物于解剖台上，用针头固定四肢，双手持镊撕开皮肤拉向两侧，暴露出腹膜，但勿伤及腹膜壁。4、再用70%酒精擦洗腹膜壁后，用注射器吸10mlEagle液注入腹腔中，同时从两侧用手指揉压腹膜壁，令液体在腹腔内充分流动。5、用针头轻轻挑起腹壁，使动物体微倾向一侧，使腹腔中液体集于针头下吸取入针管内。6、小心拔出针头，把液体注入离心管中，250g4℃离心10分钟，去上清，加10mlEagle培养基。7、计数细胞，每只小鼠可产生20～30×105细胞，其中90%为巨噬细胞。8、为获取3×105帖附细胞/平方厘米，需接种2.5×106/ml。9、为纯化培养细胞，去除其它白细胞，接种数小时后，去除培养液，用Eagle液冲洗1～2次后，再加新Eagle培养液置37℃，5%CO2温。巨噬细胞体外培养后功能检测的方法1.吞噬中性红的方法：取制备的24孔或96孔板Mφ单层，然后向每孔加入0.1%的中性红生理盐水液，继续 培养20 min，倾去上清液，用温PBS洗3遍，去除未被吞噬的中性红颗粒，每孔加入细胞溶解液(乙酸∶无水乙醇=50∶50)0.2 ml，室温下放置2～3 h，待细胞溶解后，即在酶标仪上测波长540 nm处的吸收度A，加培养基作为对照组。2.墨汁吞噬试验的方法：将巨噬细胞用PBS洗2次后，调细胞密度为5×105 ml-1，每0.1 ml加入滤纸滤过的优质墨汁10 μl。37℃温育30 min或4 h，洗去游离墨粒，甩片，Wright’s染色，油镜下计数胞浆中吞 有大小墨粒5个以上的阳性细胞。请教：小鼠腹腔巨噬细胞提取的经验方法 人巨噬细胞可从外周血或经斑蝥激发的皮疱液中获取，也可从肺灌洗液或患者腹膜透析液中分离，但操作繁锁，得量不多。许多实验室在进行基础或配合临床研究巨噬细胞功能及其与疾病的关系、或筛检免疫增强药物和探讨其作用机制时，常选用小鼠腹腔巨噬细胞为研究对象，常用的检测方法如下。单核细胞渗出血管，进入组织和器官后，可进一步分化发育成巨噬细胞，成为机体内吞噬能力最强的细胞。巨噬细胞在不同组织中的名称不同：在肺里称“肺巨噬细胞”；在神经系统里称为“小神经胶质细胞”；在骨里则称为“破骨细胞”。单核-巨噬细胞是对他们的统称。

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