农杆菌侵染拟南介 农杆菌侵染拟南芥 为什么要暗培养

拟南芥侵染时，为什么用花，侵染过程是什么原理 影响拟南芥转化效率的因素主要有以下几点：1、植株的生长状态。花序形成至初花期侵染效果最好；2、转化渗透液的成分。其中蔗糖、表面活性剂si1WetL一77、及6-BA浓度对转化效率有较大的影响。其中蔗糖浓度范围为在0.5%-5%，表面活性剂常用浓度为0.02%-0.03%，具体的使用量要根据待转化植株长势情况和对表面活性剂毒性的忍耐能力而定，使用量过多会造成结实率严重降低甚至植株的死亡。3、转化时间和次数增加转化次数能提高拟南芥的转化频率。每次转化间隔时间也不应低于5一6d。延长转化时间有助于提高转化率，但随着侵染时间延长，花序死亡率上升\"在不影响植株正常生长的前提下可适当延长转化时间，常用时间一般在30s一3min之间。4、侵染后处理。转化材料都用塑料薄膜覆盖在黑暗或弱光下放置24h后再转到正常的条件下生长\"其作用是保持植株表面的湿度，延长农杆菌转化的时间。转化2d后对植株喷水冲洗表面沾附的活性剂可以明显提高转化率。5、转化菌液浓度的影响。OD600>；2.0菌液的转化率比OD600=0.8转化率要高2倍以上。转化中通常使用农杆菌OD60O为2.0左右悬浮液进行转化。总结：实验室的浸花法转化拟南芥，供参考：菌液准备(1).培养菌液至OD600达 0.8－1.5；(2).制备重。卡那霉素培养基的作用是什么？野生型和转基因拟南芥在上面的表现有何不同 拟南芥是一种模式植物，多年来围绕拟南芥的相关研究很多，尤其是对于拟南芥转基因研究非常热门，相关的论文也有很多.原因主要有以下几个方面：1 拟南芥是一种模式植物，基因组小，克隆其基因比较简单.2 种植方便，条件易得.3 拟南芥是自花传粉植物，这样既很容易进行遗传分析.4 方法简单，不同于传统的植物转基因，不需要植物组织培养阶段，对于实验操作的要求不是很高.当前拟南芥转基因所使用的方法主要是农杆菌介导的转化（载体法），区别主要是转化的方法不同，有抽真空，花序浸染和喷雾法使用最为广泛.1农杆菌介导转化的基本流程编辑农杆菌（目标载体）液的制备↘拟南芥种植→花期（侵染）→共培养→收种→验证2农杆菌制备编辑1)从-80℃冰箱中取出lml农杆菌.2)LB培养基中添加50mg/L的卡那霉素(Kan)和100mg/L的利福平(Rif).3)把lml农杆菌加入到含有Kan和Rif抗生素的LB培养基中，28℃振荡10h.4）拟南芥转基因浸润液采用的是1/2MS，加蔗糖50g/L，PH值调至5.7.然后在15p压力下蒸汽灭菌15min，灭菌结束，冷却后保存于4℃，以待转基因使用.3转化编辑抽真空/花序浸染/喷雾法其中抽真空法转化效率最高，但是步骤麻烦，而且要将拟南芥倒置浸染到菌液中，操作不方便.喷雾法相比来说简便易。农杆菌质粒 用PBI121的话应该是一般的双元载体系统.不知道你用的是什么农杆菌菌株，GV3101吗？农杆菌自带一个转染用的Ti质粒，但是我做的时候从没提出来过，Ti质粒应该很大的.质粒大小不对，有两条带.不知道你做过重复没有.你如果不嫌麻烦可以重转一下农杆菌.也可以先做个酶切，看看酶切结果是不是正确.有的时候在菌里面同一个质粒的构像不一致就会跑出两条带，不过会挨得很近.酶切之后通常大小和带数就正确了.琼脂糖电泳就是这样。拟南芥侵染时，为什么用花，侵染过程是什么原理？原理简单来讲是农杆菌会将载体中的T-DNA区中的序列整合到宿主细胞的DNA。其实不是用的花，用的是受精卵（抑或其他生殖细胞。农杆菌转化法中，植物体必须受损吗？ 书上说，伤口处细胞会分理出酚类化合物来吸引农杆菌，如果单纯将农杆菌放入，没有酚类化合物进行吸引，就…农杆菌侵染拟南芥 为什么要暗培养 原理简单来讲是农杆菌会将载体中的T-DNA区中的序列整合到宿主细胞的DNA。其实不是用的花，用的是受精卵（抑或其他生殖细胞），理由是这些单细胞被侵染后DNA改变，其发育成的植株就成为了转基因植株（因为整个植株都是由这个单细胞发育而来用pearlygate侵染拟南芥收种子后用什么进行筛选 农杆菌侵染拟南芥花序的转化方法转化农杆菌：GV3101农杆菌感受态从-80℃取出，冰上融化，加入2-5ul质粒，去郭老师实验室电激转化（拿杯，洗，吹干，预冷，加菌液，对准方向插杯，AAgr程序，激完后看时间2.2hv、5.0s左右，每次需确定程序，需带的东西：镊子、枪、枪头、吹风机、纸、水、废液缸），激后往杯中加入200ul不含抗生素的LB，28℃，200rpm复苏30-60min，之后在含50mg/l Kan（1/1000，50mg/ml）、50 mg/l Genta（1/1000，50mg/ml）、50mg/llRif（1/200，10mg/ml）的LB选择平板上涂板，在28℃培养箱中培养2天（1天可见微小单克隆），挑单克隆划板，28℃培养箱中培养2天。预摇：挑单克隆至30ml 含50mg/l Kan（1/1000，50mg/ml）、50 mg/l Genta（1/1000，50mg/ml）、25mg/llRif（1/400，10mg/ml）的LB 中，28℃，200rpm，24h。扩培：以1：100扩培至含400ml的1L锥形瓶中，在28℃，200rpm培养13-16h（从冰箱中取出的菌扩培会慢些一般需要16h），至OD600达到1.5-2.0之间收菌，收菌条件5000rpm，8min。转化植株：转化前一天晚上或是转化当天剪去植株上所有果荚和露白的花配制5%的蔗糖溶液（每种500ml），用少量蔗糖溶液摇悬起菌，在转化前再加入0.02%的Silwet。

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