平板划线法的步骤 1．融化培养2113基：牛肉膏蛋白胨琼5261脂培养基放入水浴中加热至融4102化。2．倒平板：待培养基冷却至50℃左右1653，按无菌操作法倒2只平板(每皿约15m1)，平置，待凝固。倒平板的方法：右手持盛培养基的试管或三角瓶置火焰旁边，用左手将试管塞或瓶塞轻轻地拨出，试管或瓶口保持对着火焰；然后用右手手掌边缘或小指与无名指夹住管(瓶)塞(也可将试管塞或瓶塞放在左手边缘或小指与无名指之间夹住。如果试管内或三角瓶内的培养基一次用完，管塞或瓶塞则不必夹在手中)。左手拿培养皿并将皿盖在火焰附近打开一缝，迅速例入培养基约15m1，加盖后轻轻摇动培养皿，使培养基均匀分布在培养皿底部，然后平置于桌面上，待凝后即为平板。3．作分区标记在皿底将整个平板划分成A、B、C、D四个面积不等的区域。各区之间的交角应为120℃左右（平板转动一定角度约60℃），以便充分利用整个平板的面积，而且采用这种分区法可使D区与A区划出的线条相平行，并可避免此两区线条相接触。4．划线操作(1)挑取他含菌样品：选用平整、圆滑的接种环，按无菌操作法挑取少量菌种。(2)划A区：将平板倒置于煤气（酒精）灯旁，左手拿出皿底并尽量使平板垂直于桌面，有培养基一面向着煤气灯(这时皿盖。
关于接种大肠杆菌的问题， 对 沾过菌液后，就在培养基表面划~他也是说的理想状态~这个实验的目的就是让在表面接纯种，让学生清楚看到大肠菌群的菌落形态而已~划破了也能看到~但你也不用抱着破坏培养基的心态去做这实验~小点劲儿咱不吃亏~ps 这实.
用平板划线法时很容易刺破培养基，要怎么避免？ 可以从两方面改善：提高平板的硬度，也即可适当提高琼脂的含量，另外最好要等平板完全凝固了再涂；第二呢你的操作技术还得加强，不用急的，只要有一点菌丝就能长的
接种细菌时，如果划破琼脂会有什么问题本人认为：平板划线法接种细菌时，如果划破琼脂会造成划线不均匀，难以达到分离但菌落的目的；同时，存留在划破处的单个细胞无法形成。
