什么是「脂肪组织」,有哪些分类? 脂肪组织(adipose tissue)主要由大量群集的脂肪细胞构成,由疏松结缔组织分隔成小叶。根据脂肪细胞结…
什么是胞浆蛋白,做WB时用什么做内参? =胞浆蛋白就是胞浆里的蛋白啊…用普通的提取方法就好了,网上一搜一大堆…做胞浆蛋白的话,WB的内参一般为β-actin或者GAPDH,主要还是要看你的细胞表达哪一个。
Western Blot为什么必须要用内参 在 Western Blot 中使用内参其实就是在 WB 过程中另外用内参对应的抗体检测内参,这样在检测目的产物的同时可以检测内参的表达,由于内参。
做免疫荧光怎么看蛋白是在细胞核表达还是胞浆表达 复染细胞核百,常规用过的是DAPI进行细胞核复染(蓝色)。目的是为了鉴别目的蛋白的位置度是胞核表达,还是胞质表达或胞膜表达。一般来讲,如果是胞核表达,会和蓝色问的细胞核颜色重叠;胞质或胞膜表达则不会重合,单独看目的蛋白的表达,会看到有个黑色的空洞的,尤其细胞答图像更为明显。从楼主的图片看,貌似是在胞核表达(因为红色和绿专色都很弱,在胞质没有看到,相反却和胞核重合了)属染色质量需要进一步提高。
细菌全菌蛋白 用什么做内参 细菌全菌蛋白 用什么做内参 细菌全菌蛋白做胞浆蛋白的话,WB的内参一般为β-actin或者GAPDH,主要还是要看你的细胞表达哪一个。
western blot 内参 actin 是43还是45 kda 一、为什么要使用内参呢?Western blot除了能证明某样品含有某种蛋白之外,其最为重要的作用是比较不同条件下或者不同组织中,目的蛋白表达量的相对多少。即为蛋白表达水平最直接的证据。要衡量蛋白的表达水平,前提条件就是等量的上样量。然而如果仅将蛋白浓度测定作为规范需相互比较的各种样品间上样量等同的唯一方法,显然是不可取的。首先各种蛋白质浓度定量方法都存在局限性,不能完全准确的确定各种样品的蛋白浓度。如UV法直接定量,适合测试较纯净、成分相对单一的蛋白质,相对于比色法来说,操作简单,但是容易受到平行物质如DNA的干扰,且敏感度低,要求蛋白的浓度较高。比色法测定蛋白浓度一般有BCA、Bradford、Lowry等几种方法。BCA法与Lowry法都容易受到蛋白质之间以及去污剂的干扰。Bradford法敏感度最高,且与一些列干扰Lowry、BCA反应的还原剂(如DTT、巯基乙醇)相溶,但是对去污剂依然是敏感的,其最主要的缺点是不同的标准品会导致同一样品的结果差异较大,无可比性。另外,蛋白质定量以后进行电泳时需要等量上样,此步骤也存在操作误差。在Western Blot实验时使用内参,即可简便地对定量和上样步骤产生的误差进行校正。在Western Blot中使用内参。