我打算用流式细胞仪测成年大鼠心肌细胞内钙，请问各位 用流式细胞仪测成年大鼠心肌细胞内钙原代培养心肌细胞作为一种主要的研究模型，被广泛应用于心血管研究之中.我们实验室经过长期尝试，摸索出了一些行之有效的方法，并积累了一些经验，现总结如下：1新生大鼠鼠龄的选择新生大鼠心肌细胞在出生后3 d内具有部分的增殖能力，成年大鼠心肌细胞则为终末分化细胞，不再具有分裂增殖能力.因此，大鼠出生时间越短，其心肌细胞分离后成活率越高，越容易贴壁生长.大量观测表明，选择1~3 d龄大鼠分离其心肌细胞进行原代培养较为理想.其中尤以半日龄大鼠心肌细胞培养效果最佳.2消化酶的选择及使用新生大鼠心肌细胞的分离可采用组织块法和消化法，前者因不易获得密度均一的细胞且难控制成纤维细胞的生长而较少采用.消化法中常使用的酶有3种：胰蛋白酶、胶原酶I或Ⅱ以及透明质酸酶.透明质酸酶多与胰蛋白酶或胶原酶联合应用.胰蛋白酶作用较强，容易造成心肌细胞损坏.胶原酶作用较缓和，能消化细胞间质中的胶原纤维以释放细胞，对细胞损伤小，且在新生大鼠心肌组织，以胶原I为主，故我们选用胶原酶I.文献报道胶原酶的工作浓度一般在0.6~1 g？L1，我们使用的为0.8 g？L1.胶原酶最好现用现配.3消化程度的把握新生大鼠心肌细胞对酶。
流式细胞仪测细胞周期图怎样分析 （1）细胞培养取对数生长期的细胞，按1X106个/mL以1mL体积接种于6孔板内。培养24h后，加入不同浓度样品。在37 ℃、5%的CO2恒温箱中培养24h后终止。（2）细胞固定胰酶消化并离心收集细胞（800rpm/min），弃上清，用预冷PBS洗细胞两次，加入预冷70％乙醇，-20℃固定保存。（3）细胞染色离心收集细胞（800rpm/min），以1mL的PBS洗细胞一次，加入500uLPBS含50ug/mL溴化乙锭（PI），100ug/mL RNase A，4℃避光孵育20分钟。（4）检测以标准程序用流式细胞仪检测，汞激发波长488nm，计数8千个细胞，结果用软件WinMDI Version 2.9分析。
第一次做转染试验，请问怎样计算转染率，载体是带GFP的，就是弄不明白是用荧光的个数比上接种细胞总数吗 转染率是大概估计一下，有荧光的占总细胞的比率，如果要精确值可以去做流式。
细胞接种是什么意思 从培养瓶往板子上种细胞有时的确是需要一些经验和技巧的，因为不同的细胞在瓶子里长的数量是不一样的，我种的是平滑肌细胞，铺的很开，个头又大，这样下来一瓶的细胞量就比较少了。我一般是一个25cm2的培养瓶种四个孔，种好之后放两天后再接着处理，其实我觉得在六孔板接种细胞方面还是可以有据可依的。不怕麻烦可依把细胞拿来计数，然后每个孔接种不同数量的细胞，然后观察细胞的生长情况，这样就可以得到自己的细胞比较准确的资料了。不过在接种板子的时候细胞生长容易出现一个现象，就是中间的长的密，周围的长的疏，出现这个问题以我在园子上看到的帖子和自己的经历来看，主要是把细胞接种到板子上后再加培养基进行稀释的结果，无论你怎么在板子里面混匀效果都不是很好。到目前我找到的最好的办法就是先在瓶子里稀释好以后直接接种到板子上。我觉得在细胞接种六孔板这个问题上最重要和最难把握是细胞的接种密度和对细胞生长程度的把握，即如何判断细胞长到什么程度拿去实验效果最好，希望有经验的战友多谈谈这方面的经验。最好能有自己的个案，比如说做流式等这些实验的时候对细胞接种是如何把握的。以前铺6孔板和24孔板，经常不匀，通常就是战友们所说的中间多。
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单克隆抗体制备的基本原理与过程？有什么意义？ 哈哈~我们刚考到这题原理：B淋巴细胞在抗原的刺激下，能够分化、增殖形成具有针对这种抗原分泌特异性抗体的能力。B细胞的这种能力和量是有限的，不可能持续分化增殖下去，。
第一次做转染试验，请问怎样计算转染率，载体是带GFP的，就是弄不明白是用荧光的个数比上接种细胞总数吗
