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荧光标记对基因表达检测的作用是什么呢? 萤光素酶报道基因测定

2020-10-11知识13

荧光标记对基因表达检测的作用是什么呢? 在基因表达检测应用中,荧光标记的探针常常是通过反转录酶催化cDNA合成RNA,在这一过程中掺入荧光标记的核苷酸

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3utr是构建到荧光素酶报告基因的上游还是下游

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荧光定量PCR是用来干什么的? 做荧光定量PCR技术介绍的PPT,知道过程原理了,就是不知道为什么要荧光定量,网上查到说是什么mRNA逆转…

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绿色荧光蛋白在细胞生物学中有哪些应用?

萤火虫有哪些应用领域? 萤火虫的研究不仅包含有昆虫生物学方面的一般知识,而且在萤火虫的发光机理和功能及其仿生学研究,萤火虫的生态学和生态环境保护等方面都将有广泛的意义。仿生学的应用萤火虫发光的效率非常高,几乎能将化学能全部转化为可见光,是现代电光源效率的几倍到几十倍;萤火虫发出来的光虽亮但几乎没有辐射热量,也不产生磁场,是一种非常理想的灯光。早在20世纪60年代,人们模拟萤火虫发光的原理创造出了日光灯(荧光灯)。另外美国的生物化学家根据萤火虫的发光原理和机制,提出了电子转移反应原理,它可以解释腐蚀现象、光合作用等,并导致了激光器的开发和利用。萤火虫荧光素酶的应用自McElory等首次应用萤火虫荧光素酶测定ATP以来,荧光素酶在生物化学及生物技术的分析应用不断发展,其检测和研究范围包括:临床医学及法医学检测;生命科学研究;环境监测和制备广谱酶联免疫检测试剂。随着科学的发展,人类对萤火虫发光特性的研究和利用正在走向一个新的层次,即在搞清萤火虫荧光素酶的氨基酸序列和碱基序列的基础上,克隆出荧光素酶基因,并试图将它转移到其它昆虫和其它生物上。据报道,荧光酶基因点亮了小鼠体内的前列腺癌基因的表达,有望用来监测早期前列腺癌的发生以及治疗效果;在其它。

报告基因和标记基因的区别是什么 标记基因2113通常用来检验重组DNA载体转化5261成功与否,或者检测目的基因在植物4102细胞或组织1653中的定位。常用的标记基因是一些抗生素抗性基因,如卡那霉素抗性基因、潮霉素标记基因等。如:某种具有氨苄抗性基因质粒(该基因即可认为标记基因),与外源DNA片段组合形成重组质粒,并被转入受体细胞后,就可以根据受体细胞是否具有氨苄抗性来判断受体细胞是否获得了目的基因。当用选择培养基(比如含有氨苄的培养基),来培养受体细胞时,能够在培养基中存活下来的受体细胞就可以认为是成功的导入了外源DNA,标记基因就起作用了。作为报告基因,在遗传选择和筛选检测方面必须具有以下几个条件:(1)已被克隆和全序列已测定;(2)表达产物在受体细胞中不存在,即无背景,在被转染的细胞中无相似的内源性表达产物;(3)其表达产物能进行定量测定。目前常用的报告基因有氯霉素乙酰转移酶基因(cat)、荧光素酶基因(luc)、β-葡萄糖苷酸酶基因(gus)、分泌型碱性磷酸酶基因(seap)、绿色荧光蛋白基因(gfp)等。如:绿色荧光蛋白(gfp)基因。绿色荧光蛋白来源于海洋生物水母,其基因可在异源组织中表达并产生光,GFPCdnad开放阅读框架长度约740bp,编码238个氨基酸残基,其。

报告基因的列举 (1)最常用的报告基因大多是编码抗生素抗性蛋白的基因,通过检查产物是否具有抗生素的抗性来确定基因的表达情况。(2)氯霉素乙酰基转移酶(CAT):该报告基因来源于大肠杆菌转位子9,是第1个用于检测细胞内转录活性的报告基因。氯霉素乙酰基转移酶可催化乙酰CoA的乙酰基转移到氯霉素3羟基,而使氯霉素解毒。CAT在哺乳细胞无内源性表达,性质稳定,半衰期较短,适于瞬时表达研究。可用同位素、荧光素和酶联免疫吸附测定(enzyme—linkedimmunosorbantassay,ELISA)检测其活性,也可进行蛋白质印迹(Westernblotting)和免疫组织化学分析。CAT与其他报告基因相比,线性范围较窄,灵敏性较低。(3)β半乳糖苷酶:β半乳糖苷酶由大肠杆菌lacZ基因编码,可催化半乳糖苷水解。最大优势是易于用免疫组织化学法观测其原位表达,是最常用的监测转染率的报道基因之一。以邻—硝基苯—β—D—半乳吡喃糖苷(ONPG)为底物可用标准的比色法检测酶活性,其检测动力学范围为6个数量级。氯酚红—β—D—半乳吡喃糖苷(CPRG)是另一个可用比色法检测酶活性的底物,其灵敏度比ONPG高近10倍。以MUG和荧光素二半乳糖苷(FDG)为底物则可用荧光法检测其活性。此法可检测单个细胞的酶活性,并可。

为什么我测的3'utr 突变载体的荧光素酶比值高于1 目的针对促肝细胞再生磷酸酶1(phosphatase of regenerating liver-1,PRL-1)3’端非翻译区(3-untranslatedregion,3’UTR)。

her2多少个加才是阳性 her2是原癌基因人类表皮生长因子受体2的英文缩写,是乳腺癌预后判断和是否适合靶向治疗的重要参考指标。Her2病理学检测结果有0、1+、2+、3+四种情况,0和1+为阴性,3+一般。

如何检测 DNA 甲基化? 图 13.MSP 检测 DNA 甲基化的原理[6](图片来源:https://www.mgmed.com/) 首先抽提 DNA,进行重亚硫酸盐转化,未甲基化的 C 转变为 U,随后用两对引物进行 PCR,一对引物。

#生物技术#科普#萤火虫#氯霉素#基因合成

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