做相对定量PCR 时，目的基因CT 值比内参基因CT 值低，是什么原因，别人 有多种原因。如果根据经验目的基因的表达确实应该低于内参基因的话，常见的问题是模板异常，如严重的DNA污染等。但也不排除其他原因，如引物特异性等。
荧光定量PCR的内参和目的基因一定要放一起吗 荧光定量PCR的内参和目的基因一定要放一起内参就是一个表达量在各个组基本保持不变的基因，又叫看家基因，比如常用的GAPDH，actin。或者18s rRNA也可以。如果内参表达量一致，说明你PCR的上样量一致，样本的质量也一致。如果出入很大，说明你的样本的浓度或者是质量有问题。测到的目的基因的表达量就不可靠了
看家基因GApDHmRNA引物是什么东西？有什么用？成分？ 引物，作为DNA复制的起始点，在核酸合成反应时，作为每个多核苷酸链进行延伸的出发点而起作用的多核苷酸链。GAPDH的一个引物与感兴趣区域一端的一条DNA模板链互补，另一个引物与感兴趣区域另一端的另一条DNA模板链互补。可以有很多种，用软件可以设计一段基因的引物，再用PCR来扩增这段基因。GAPDH是甘油醛-3-磷酸脱氢酶（glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase）的英文缩写。该酶是糖酵解反应中的一个酶。该基因是看家基因，几乎在所有组织中都高水平表达，在同种细胞或者组织中的蛋白质表达量一般是恒定的，且不受含有的部分识别位点、佛波脂等的诱导物质的影响而保持恒定，故被广泛用作realtime pcr，Western blot等实验操作的标准化的内参。
内参一直很好，目的基因扩增不出来，能说明引物有问题吗 可以分别扩增的。分别用针对这两个基因的特异性引物扩增即可。
什么事管家基因？怎么用？内参基因又是怎么回事？ 内参基因 内参即是内部参照，它们在各组织和细胞中的表达相对恒定，在检测基因的表达水平变化时常用它来做参照物。其作用是校正上样量、上样过程中存在的实验误差，保证。
