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为什么PCR要经历三十多次循环? 跑PCR循环次数过多

2020-10-10知识11

PCR循环次数是否越多越好?为什么 PCR循环次数通常就是30左右.循环数太多了,虽然可以一定程度的提高产物量,但是由于反应时间过长,有一些非特异产物的扩增也会相应增加,而且随着酶的扩增能力下降,合成目标片段的能力也会随之下降,也可能引起其他的非特.

为什么PCR要经历三十多次循环? 跑PCR循环次数过多

PCR循环数过多会有哪些后果 PCR循环次数通常就是211330左右。循环数太5261多了,虽然在一定程度4102上能够提高产物量,但是由于反应时间过1653长,有一些非特异产物的扩增也会相应增加;而且随着酶的扩增能力下降,合成目标片段的能力也会随之下降,也可能引起其他的非特异性扩增。我们实验室一直用的是诺唯赞的酶,循环数一般就设为30-35度,有时候模板浓度比较低,可能循环数会设的多一些。希望对你有帮助。

为什么PCR要经历三十多次循环? 跑PCR循环次数过多

pcr循环次数为什么不能超过35次 循环次数主要取决于实验材料等 比如酶的活性能够维持到第几次循环,这才是限制因素。35这个数字不知道从哪来的。

为什么PCR要经历三十多次循环? 跑PCR循环次数过多

PCR一般要经历三十多次循环,为什么? 大家好,我不是权威,我是漫步科研路。PCR几乎是我们做科研的人天天都要做的事情,跟吃饭睡觉一样频繁。提出这个问题说明你还对PCR不太了解。PCR就是聚合链式反应,而我们进行PCR有很多种用途。根据用途的不一样,循环次数也不一样。当然有一点可以肯定的是循环数越多得到的PCR产物就越多,因为PCR产物的增加是以2的循环数次方增加的。我来举几个例子,比如你如果要去扩增一个基因做基因克隆,这个时候你需要保证的PCR产物的量一定要大,不然后续的克隆成功率低,这样的话对于表达量还好的基因大概就像你说的30几个循环就够了,但是有些基因表达量太低,这样你的起始模板量太低,你就可能需要跑40个循环。而一些基因起始量很高,可能你只需要扩增20几个循环就够了。我们也会做定量PCR,这个是最近新冠病毒的核酸检测办法,直接进行荧光PCR扩增就能搞定。而这里的循环数也是根据情况去看。有可能需要40个循环,也有可能只需要20几个循环就搞定了。所以PCR循环数的选择是根据你起始模板量的多少和你最终需要多少PCR产物量来决定,不是固定的30几个循环。希望我的回答能帮到你,有问题也可以私信我。我们做这个做的太多了。

大家的PCR一般都跑多少个循环啊

为什么PCR要经历三十多次循环? 在复性2113过程中引物与DNA模板链的结合是由碱基互补配5261对原理完4102成的。PCR循环数通1653常约为 30 个,循环次数过多,虽然可以在一定程度上增加产品的数量,但由于反应时间长,一些非特异性产品的扩增也会相应增加,并且随着酶扩增能力的降低,合成靶片段的能力也会降低,这也可能引起其他非特异性扩增。DNTP也将被消耗,如果一个dNTP消耗很多,后续的扩增将不可避免地导致不匹配。因此,如果产品足够用于后续分析,循环时间将不会过度延长。在选定的变性温度下,DNA分子越长,完全分离两条链所需的时间就越长。如果变性温度太低或时间太短。通常只有模板DNA中富含AT的区域被变性,在PCR的第一个周期中,有时变性时间通常设计为 5 min,以增加大分子模板DNA也称为预变性完全变性的可能性。当模板DNA的G+C含量超过 55%时,需要更高的变性温度,源自古细菌的DNA聚合酶比TaqDNA聚合酶对高温的抵抗力更高。因此,它更适合扩增富含GC的DNA模板,复性过程中使用的温度比如:I.E.退火 是至关重要的,如果复性温度过高,寡核苷酸引物不能用模板很好地复性,扩增效率将非常低。从这个角度来看,绝大多数扩增产品应该是特异性扩增产品,而非特异性扩增产品太低而无法。

PCR循环次数能超过40次吗 可以的,一些模板浓度极低的样品,或者大片段扩增,为了获得足够的产物,有时候会超过40个循环。也有一些特殊的PCR,如染色体步移中的扩增,要扩增超过40个循环。

在PCR反应中,循环次数是否越多越好?为什么? 这个思路很好

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