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扩增曲线不光滑 实时荧光定量PCR中华扩增曲线为什么不平滑?

2020-10-10知识14

定量PCR的扩增曲线的平台期为什么是锯齿状 1、反应体系随着PCR的进行,造成阻碍物增多,到平台期时达到最高水平,影响机器的正常检出;需要优化反应体系各个离子的含量2、机器本身不稳定造成的影响,不过这种情况很少发生

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做PCR时Ct值较小,扩增曲线跑不上去是为什么? Ct值小说明模板的起始浓度大,可以适当降低模板浓度.曲线跑不上去原因有很多,可能是引物的问题也有可能是酶的原因,还是得看具体情况.

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荧光PCR反应中,低浓度的扩增曲线会歪是什么原因? 你说的标准品的浓度是和你的标本比较那个更低呢?如果标准品和标本在大概相同的CT值时只是标本曲线往下爬的话,我猜测是你的标本模板不干净,有抑制物进去了,因为曲线往下趴明显就是扩增效率的问题,扩增效率不高,有引物设计问题也有酶反应问题,既然你说标准品不会,那就说明引物设计没问题。如果标准品的CT要比标本小很多,标本在低浓度下趴也很正常,当引物模板浓度低,如果PCR体系设计不是很牛逼的话低浓度时下趴是正常的。

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