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PCR和实时荧光定量PCR这两种有什么区别 实时荧光定量pcr技术数据处理

2020-10-10知识24

实时荧光定量PCR与普通PCR的区别是什么?结果有何异同?能说明的问题是什么? 原理不同:荧光定量pcr实时监测与dna结合的荧光染料激发的荧光;普通pcr通过检测插入dna中核算染料的量来测定pcr最终产物量,一般是紫外光.反应要求:荧光定量对扩增片段有较高的要求,一般为100-300bp;普通定量可以扩增长点的片段.如果不需要检测产物分子量大小,荧光定量可以不进行电泳就对产物进行定量分析,普通pcr必须电泳.结果:荧光定量可以实现精确定量,普通pcr则不行.荧光定量体现可以看到整个扩增过程,可以看到扩增效率,溶解温度,直接得到的标准曲线等,这些是普通pcr无法实现的.如果还不清楚建议去丁香园等网站逛逛,希望可以帮到你

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实时荧光定量pcr数据如何统计? 首先你这样做出来的统计没有意义.应该是至少3次独立实验,而不是重复3次PCR.如果3次试验,每次重复3次(取平均值算一次).然后先定各个基因在对照组的值为一,再算出其他组该基因的相对量,比如内参CT值一样(都是15),而TNF的CT值对照组是20,而模型组是19,则相对量是2(对照组为1).ct=(19-15)-(20-15)=-1,2-△ct=2.以此类推.其实你只有3组,2个基因.用ANOVA先算,然后再用t test就可以了.结果表达为TNF:对照组1,模型组想x±d,药物组y±d.NF-kB:对照组1,模型组想x±d,药物组y±d.TNF和NF-kB间不需要比较.请参考我发表的文章:如果你提供email,我可以发全文给你.

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实时定量PCR的结果是怎样分析的 1、如果有2113标准曲线,按照标准曲线计算5261。2、一般都是相对量4102,则用delta delta CT方法来计算。3、举例1653如下:对照组基因A的CT值为20,内参(比如βactin)CT值15。实验组基因A CT值18,内参CT值14。4、首先算加样量:delta CT=15-14=1。2的1次方是2。也就是说实验组的加样量是对照组的2倍。基因A:delta CT=20-18=2。2的2次方是4。也就是说基因A的量在实验组是对照组的4倍。但是由于加样量是2倍,所以4处以2=2,最后的相对量是2倍。5、几点注意:必须确定扩增的特异性,只有相同目标的CT值才能相减(扩增效率有可能不同),2的某次方只是理论值,实际扩增效率低于2,最好不用Syber Green。扩展资料:PCR原理:1、PCR技术的基本原理类似于DNA的天然复制过程,其特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物。2、PCR由变性-退火-延伸三个基本反应步骤构成:①模板DNA的变性:模板DNA经加热至93℃左右一定时间后,使模板DNA双链或经PCR扩增形成的双链DNA解离,使之成为单链,以便它与引物结合,为下轮反应作准备;②模板DNA与引物的退火(复性):模板DNA经加热变性成单链后,温度降至55℃左右,引物与模板DNA单链的互补序列配对结合;③引物的延伸:DNA。

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