实时荧光定量PCR与普通PCR的区别是什么？结果有何异同？能说明的问题是什么？ 二者2113结果相同。都能说明生物体外的特殊DNA复制的整个5261过程的扩增4102效率和溶解温度1653情况。区别：1、二者系统组成不同荧光定量PCR仪比普通的PCR仪多了荧光信号采集系统和计算机分析处理系统。2、二者原理不同荧光定量PCR实时监测与DNA结合的荧光染料激发的荧光，普通OCR通过检测插入DNA中核算染料的量来测定PCR最终产物量。3、二者反应要求不同荧光定量PCR对扩增片段有较高的要求，一般为100-300bp，普通PCR可以扩增长点的片段。4、二者应用不同荧光定量PCR主要是用来定量分析和确定基因转录水平的，普通的PCR仪是做定性分析和扩增基因片段，定量PCR仪可以做普通PCR仪的工作，反之不行。5、二者测量成本不同定量PCR仪价格较为昂贵，普通的基因扩增仪(PCR仪)只能够定性地分析是否存在目标片段。但是价格要低很多，而且运行成本也要低很多。实时荧光定量PCR技术有效地解决了传统定量只能终点检测的局限，实现了每一轮循环均检测一次荧光信号的强度，并记录在电脑软件之中，通过对每个样品Ct值的计算，根据标准曲线获得定量结果。参考资料来源：-实时荧光定量PCR参考资料来源：-PCR
什么是染色质免疫共沉淀技术（ChIP）？ 染色质免疫共沉淀技术是在保持组蛋白和DNA联合的同时，通过运用对应于一个特定组蛋白标记的生物抗体，染色质被切成很小的片断，并沉淀下来的技术。这项技术主要用来分析目标基因有没有活性、或者分析一种已知蛋白（转录因子）的靶基因有哪些。该技术主要应用于以下几方面：1.组蛋白修饰酶的抗体作为“生物标记”2.转录调控分析3.药物开发研究4.有丝分裂研究5.DNA损失与凋亡分析扩展资料：实验步骤：1、细胞固定甲醛能有效的使蛋白质-蛋白质，蛋白质-DNA，蛋白质-RNA交联，形成生物复合体，防止细胞内组分的重新分布。甲醛的交联反应是完全可逆的，便于在后续步骤中对DNA和蛋白质进行分析。交联所用的甲醛终浓度为1%，交联时间通常为5分钟到1个小时，具体时间根据实验而定。值得注意的是，交联时间如果过长，细胞染色质难以用超声波破碎，影响ChIP结果，而且实验材料也容易在离心过程中丢失。交联时间如果过短，则交联不完全，产生假阴性。甲醛的交联反应可被加入的甘氨酸终止。2、染色质断裂交联后的染色质可被超声波或Micrococcal Nuclease切成400~600 bp的片段（用琼脂糖凝胶电泳检测），以便暴露目标蛋白，利于抗体识别。超声波是使用机械力断裂染色质。
CR扩增效率低或过高的原因有哪些 在qRT-PCR实验中有必要加入无逆转录酶对照（“非扩增对照。没有正确地设置基线和阈值线为了得到精确的Ct值。一个好的对照，这样做有助于改善qRT-PCR的样品间差异以及样品定量过程中的误差，其可以破坏DNA.6 gt，阈值应当设置在基线至少10个标准差范围内，在设置建立多个反应时应当使用它来最小化样品间和反应孔间的差异以提高可重复性，而NAC及NTC则不会产生任何明显的荧光信号，请选择在目标mRNA中至少跨越一个外显子-外显子接合点的PCR引物对。若无法使用完全完整的RNA。通常我们使用18S rRNA作为对照。使用了低质量的RNA已降解的或低纯度的RNA会抑制反转录效率并降低得率，这些因素包括扩增子的长度；探针的Tm值，如RNAlater#174；3。大多数引物设计程序均包含了可调节的参数以设计最佳的引物和探针。标准曲线数据点应当覆盖您的目标基因期望丰度、二级结构以及扩增子大小等重要因素，或者经过RNA稳定试剂处理过的组织。未使用“预混液”qRT-PCR是一种分析RNA的高灵敏工具，应当在丰度最高的样品所对应Ct值两个循环之前设置基线。通常，实验样品在扩增子熔解温度下会产生一个清晰的峰（一阶导数图）。典型情况下。尽管扩增效率落在上述范围之外时，其中含有除。
荧光定量PCR的扩增产物长度为什么不能太长？ Taqman探针为基础的Real-time PCR以引物和探针序列决定反应的特异性，而通过荧光强度判断探针降解程度，从而推断模板量.传统PCR通过琼脂糖凝胶电泳判断产物量，达到半定量的目的.由于EB等染色剂与较长片段DNA结合后才能显现可测量的荧光，因而往往产物大小为150-1000 bp.Real-time PCR通过反应中得到的荧光强度/循环数的比例关系得出结果，因而不需要加长产物.产物长度短还能够简化热循环反应条件，减少反应时间.当然在条件允许的情况下，尽量增长产物长度
实时荧光定量PCR扩增效率低怎么办
如何判定荧光定量结果的真实性？ 我是南农的一名小博，一直在用promega的荧光定量试剂做荧光定量实验。自认为对荧光定量实验有充分的了解…
请问实时定量PCR的绘制溶解曲线应该从多少度开始升温？我的实验结果里，溶解曲线在55度时候有个小峰，请问可能是什么原因造成的？ 如果扩增产物只有目标序列的话就应该只有一个峰的.1.简单的说来，溶解曲线就是在采用荧光染料法进行实时定量PCR时采用的一种分析手段.当体系的温度逐渐升高的时候，体系中的PCR产物慢慢的由双链变成单链，这是一个逐渐.
定量PCR的质量评价 RNA 定量的程序很多，比较用了Ribogree，Agilent BioAnalyser，spectrophotometer，Nanodrop and the BioRad Experion 来定量同样的样品。结果显示没有哪两种方法得到同样的。
如何针对一名细菌感染患者进行病原生物学的诊断 病原生物学的诊断一般通过1、体液、血液粪便中细菌培养，形态学鉴定；2、免疫学鉴定；3、蛋白组鉴定4、核酸鉴定，PCR/RT-PCR；
请详细介绍一下RNA干扰？ 希望有这些方面的专业人士解答 RNA干扰（RNA interference，RNAi） 是指在进化过程中高度保守的、由双链RNA（double-stranded RNA，dsRNA）诱发的、同源mRNA高效特异性降解。
