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Western 印迹法中,硝酸纤维素膜上的蛋白质,已经被SDS变性,为什么一抗还能识别?一抗识别的是什么? 碧云天 尼氏染色

2020-10-07知识7

尼罗红染色后自然光照下多久粹灭 尼罗红染色藻细胞中性脂 荧光显微镜观察 淬灭太快 来不及拍照因为染色是在藻液里面进行,观察的时候也是直接滴了一滴染好的就拿去荧光显微镜下看,但是荧光一打上黄色的。

牡丹鹦鹉分类,牡丹鹦鹉是家养小型鸟类中最为常见的一种,它又被称为情侣鹦鹉、爱情鸟。它共计九个品种,其中因为花色繁多,而导致许多初入门的鸟友无法辨别。。

western blotting的原理、操作步骤及意义 一。免疫印迹法免疫印迹法(immunoblotting test,IBT)亦称酶联免疫电转移印斑法(enzyme linked immunoelectrotransfer blot,EITB),因与Southen早先建立的检测核酸的印迹方法Southen blot相类似,亦被称为Western blot。免疫印迹(western blotting)是在蛋白质电泳分离和抗原抗体检测的基础上发展起来一项检测蛋白质的技术。它将SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳的高分辨力与抗原抗体反应的特异性相结合。典型的印迹实验包括三个步骤①蛋白质的电泳分离;②将电泳后凝胶上的蛋白质转移至固体膜上,用非特异性,非反应活性分子封闭固体膜上未吸附蛋白质区域;③免疫学检测。免疫印迹克服了聚丙烯酰胺凝胶电泳后直接在凝胶上进行免疫学分析的弊端,极大地提高了其利用率、分辨率和灵敏度,使其成为使用最广泛的免疫化学方法之一。第一阶段为SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)。抗原等蛋白样品经SDS处理后带阴电荷,在聚丙烯酰膪凝胶中从阴极向阳极泳动,分子量越小,泳动速度就越快。此阶段分离效果肉眼不可见(只有在染色后才显出电泳区带)。第二阶段为电转移。将在凝胶中已经分离的条带转移至硝酸纤维素膜上,选用低电压(100V)和大电流(1~2A),通电45min。

western blot 试验中蛋白转膜总是颜色很浅。。 分子量是27KD,电流和电压多少合适,应该转多长时间。. 注:本资源来源于网络。(1)通常如果使用Bio-Rad的标准湿式转膜装置,可以设定转膜电流为300-400mA,转膜时间为30-60)分钟。也可以在15-20mA转膜过夜。转膜时也可以使用碧云天的多功能电泳仪(带定时)。具体的转膜时间要根据目的蛋白的大小而定,目的蛋白的分子量越大,需要的转膜时间越长,目的蛋白的分子量越小,需要的转膜时间越短。(2)在转膜过程中,特别是高电流快速转膜时,通常会有非常严重的发热现象,最好把转膜槽放置在冰浴中进行转膜。(3)转膜的效果可以观察所使用的预染蛋白质分子量标准,通常分子量最大的1-2条带较难全部转到膜上。转膜的效果也可以用丽春红染色液对膜进行染色,以观察实际的转膜效果。也可以用考马斯亮蓝快速染色液对完成转膜的SDS-PAGE胶进行染色,以观察蛋白的残留情况。

求DAPI染色法的步骤,包括DAPI配制,保存,染色方法及注意事项,不要百度百科那个,本人已经看过了。希望 原来5261用dapi是用做原位杂交的4102配置的时候用灭菌水配置就可以了1653,以前用的浓度时1ml里面加2ul就可以了配置好的溶液保存在4℃就行,尽量避光,原液要用黑色的或锡箔纸包好放到-20℃为好原来是染载玻片上的染色体,直接滴到载玻片上就好了,之后用缓冲液洗净注意事项就是别沾到手上了,那个东西还是很毒的,染色的时候尽量避光,用个盖子之类的遮一下比较好

碧云天Tunel试剂盒室温下DAB染色一小时无法染色?碧云天Tunel试剂盒室温下 B染色一小时无法染色,4℃过夜染色,整张片全染成棕黄色,求助 答:烃不可能与Na2CO3反应。。

SDS-PAGE的操作步骤(1)SDS-PAGE凝胶配制 SDS-PAGE凝胶可以参考一些文献资料进行配制,也可以使用碧云天生产的SDS-PAGE凝胶配制试剂盒(P0012A)。该试剂盒提供了除水和配胶。

TUNEL检测的实验方法 a.PBS或HBSS洗涤一次。b.如果细胞贴得不牢,可以干燥样品使细胞贴得更牢。c.用4%多聚甲醛或碧云天生产的免疫染色固定液(P0098)固定细胞30-60分钟。d.用PBS或HBSS洗涤一次。e.加入含0.1%Triton X-100的PBS,冰浴孵育2分钟。f.转步骤5。a.收集细胞(不超过200万细胞),PBS或HBSS洗涤一次。b.用4%多聚甲醛固定细胞30-60分钟。为防止细胞聚集成团,宜在侧摆摇床或水平摇床上缓慢摇动的同时进行固定。c.用PBS或HBSS洗涤一次。d.用含0.1%Triton X-100的PBS重悬细胞,冰浴孵育2分钟。e.转步骤5。a.二甲苯中脱蜡5-10分钟。换用新鲜的二甲苯,再脱蜡5-10分钟。无水乙醇5分钟。90%乙醇2分钟。70%乙醇2分钟,蒸馏水2分钟。b.滴加20μg/ml不含DNase的蛋白酶K,20-37℃作用15-30分钟(不同组织的最佳作用温度和时间需自行摸索)。c.PBS或HBSS洗涤3次。注意:这一步必须把蛋白酶K洗涤干净,否则会严重干扰后续的标记反应。d.转步骤5。a.用4%多聚甲醛固定细胞30-60分钟。b.PBS或HBSS洗涤2次,每次10分钟。c.加入含0.1%Triton X-100的PBS,冰浴孵育2分钟。d.转步骤5。a.用PBS或HBSS洗涤2次。b.在样品上加50μl TUNEL检测液,37℃避光孵育60分钟。注意:孵育时需注意在周围用浸足水的纸。

Western 印迹法中,硝酸纤维素膜上的蛋白质,已经被SDS变性,为什么一抗还能识别?一抗识别的是什么? 先简略说明去垢剂的变性原理:SDS是阴离子去垢剂,与蛋白质疏水基团结合,浓度低时主要破坏氢键,浓度足…

碧云天的苏木素伊红染色试剂盒好用吗 好不好用,要用过才知道啊。试剂盒说明:苏木精-伊红染色法(Hematoxylin-Eosin staining),简称HE染色法,是病理学常规制片中最基本的染色方法。苏木精染液为碱性,主要使细胞核内的染色质与胞质内的核糖体着紫蓝色;伊红为酸性染料,主要使细胞质和细胞外基质中的成分着红色。染色过程需要优化,着色情况与组织或细胞的种类有关,也随其生活周期及病理变化而改变。例如,很多细胞在新生时期胞浆对伊红着色较淡或轻度嗜碱,当其衰老时或发生退行性变则呈现嗜伊红浓染。胶原纤维在老化和出现透明变性时,伊红着色由浅变深。本产品所包含试剂均为工作液,可直接使用。操作说明(以下步骤仅供参考):(一)石蜡组织切片染色。1.取材组织块,经固定后,常规石蜡包埋,切片。2.石蜡切片脱蜡水化:二甲苯(I)中脱蜡5min。换用新鲜的二甲苯(Ⅱ),再脱蜡5min。无水乙醇5 min。95%乙醇2min。80%乙醇2min70%乙醇2min。蒸馏水2min。3.苏木素染液染色5-20min(具体时间根据染色结果和实验要求调整),自来水冲洗。4.分化液分化30s。5.自来水浸泡15min或温水(约50℃)5min。6.置伊红染液2min(具体时间根据染色结果和实验要求调整),自来水冲洗。7.自来水浸泡5min。。

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