常用的体外转录载体（带T7启动子的）有哪些 通过大肠杆菌表达目的基因大量获得重组蛋白是一个方便快捷的方法。植物中克隆的目的基因被克隆到特异设计的质粒载体上，受噬菌体T7强启动子控制；表达由宿主细胞提供的T7 RNA聚合酶诱导。当需要表达蛋白时，在细菌培养基中加入IPTG来启动表达。不同载体在邻近克隆位点处具有编码不同的多肽“标签”的序列，在定位、检测或纯化目的蛋白时提供方便。以pET-32a(+)为例，介绍将目的基因克隆进载体并进行表达获得重组蛋白的过程，从而熟悉根据自己的要求采用不同的载体进行原核表达的全过程。1.准备工作(试剂配置和器材准备)1)操作流程示意图主要步骤操作①制备pET-32a(+)载体 用限制性酶消化，去磷酸化后胶纯化回收②制备插入DNA PCR装入质粒后进行限制性消化，再回收③插入片段克隆到pET-32a(+)载体 插入片段与pET连接，转化④转化表达宿主菌BL21 转化带有T7RNA聚合酶基因的菌株⑤诱导表达目的蛋白 SDS-PAGE，Western 印迹、定量分析确定目的蛋白⑥放大试验纯化目的蛋白 放大试验，制备粗提物，亲和纯化，切除融合标签2)配制生长培养基如LB，和100mM IPTG，50μg/ml 卡那霉素存储液。3)宿主菌的保存。长期存放菌株和pET重组子应保存于甘油中。4)感受态细胞的制备，参照。
关于启动子位置问题 启动子是基因（gene）的一个组成部分，控制基因表达（转录）的起始时间和表达的程度。启动子就像“开关”，决定基因的活动。既然基因是成序列的核苷酸，那么启动子也应由核苷酸组成。启动子本身并不控制基因活动，而是通过与称为转录因子的这种蛋白质结合而控制基因活动的。转录因子就像一面“旗子”，指挥着酶(RNA聚合酶RNA polymerases)的活动。这种酶指导着RNA复制。启.
启动子为什么在5端，而从3端开始转录 模板链上是在3端没错，而转录的启动子在5端是针对编码链而言，编码链和mRNA对应的
T7是启动子还是RNA聚合酶？有点晕，最好用通俗易懂的话说一下，谢谢
转录时，是以DNA分子的一条链为模板还是以DNA分子的任意一条链为模板？
在DNA转录为RNA的过程中，启动子序列在模板链还是编码链？ 凡是核酸合成，都是5‘到3’端，因为必须是NTP的磷酸基团提供能量，才能连接到核糖的3位上。你把概念搞错了，当DNA作为模板链的时候，RNA是与该链互补的，所以这条链叫做反义链，而有义链是和它互补的那条DNA链。在画图的时候，一般是画有义链上的，而有义链和RNA的序列一样。
