定量pcr需要看家基因

急问：用实施定量PCR测基因表达水平，是先提提总RNA吗？然后再分离出mRNA？对不对？另外，Ct值是直接得出 Ct值是通过PCR仪的分析软件直接得出 的，一般要做一个看家基因座内参 待测基因引物和管家基因引物，他们的pcr反应条件不一样啊，怎么可以同时放一块板子上进行定量pcr啊，不懂啊 童鞋，保险你按照你待测基因的反应条件，另设计一对看家基因引物，或者换个看家基因也行的。要做定量，反应效率要控制在100％－10％的啊。 看家基因作用是什么？实时荧光定量PCR技术中为什么要用它？ 看家基因的意思是稳定表达的一种基因所以他的作用就是用来做内参比如在做PCR的时候，初始的模板量的不同直接导致扩增后的量的差别，那么看家基因的作用就出现了，要在看家基因的表达水平相同的情况下，比较其他基因的表达是否有升高或降低。 内源基因在pcr检定转基因成分时起什么作用 建立一种利用TaqMan荧光PCR定量技术不依赖参比内源基因测定转基因植物外源基因拷贝数的分析方法。方法：以转基因大豆RRS和转基因玉米Bt176为材料,通过转基因植物外源基因与... 看家基因作用是什么?实时荧光定量PCR技术中为什么要用它? 看家基因的意思是稳定表达的一种基因 所以他的作用就是用来做内参 比如在做PCR的时候,初始的模板量的不同直接导致扩增后的量的差别,那么看家基因的作用就出现了,要在看家... 实施定量PCR扩管家基因失败，为什么？ 博凌科为-为你解答：荧光摄取的温度是否正确？应该在溶解曲线峰的前面的温度收集 做相对定量PCR 时，目的基因CT 值比内参基因CT 值低，是什么原因，别人 有多种原因。如果根据经验目的基因的表达确实应该低于内参基因的话，常见的问题是模板异常，如严重的DNA污染等。但也不排除其他原因，如引物特异性等。 荧光定量PCR的内参和目的基因一定要放一起吗 荧光定量PCR的内参和目的基因一定要放一起内参就是一个表达量在各个组基本保持不变的基因，又叫看家基因，比如常用的GAPDH，actin。或者18s rRNA也可以。如果内参表达量一致，说明你PCR的上样量一致，样本的质量也一致。如果出入很大，说明你的样本的浓度或者是质量有问题。测到的目的基因的表达量就不可靠了 什么事管家基因？怎么用？内参基因又是怎么回事？ 内参基因 内参即是内部参照，它们在各组织和细胞中的表达相对恒定，在检测基因的表达水平变化时常用它来做参照物。其作用是校正上样量、上样过程中存在的实验误差，保证实验结果的准确性。借助检测每个样品内参的量就可以用于校正上样误差，这样半定量的结果才更为可信。一般要选择一个在处理因素作用的条件下不会发生表达改变的基因作内参。在进行基因研究的过程中,实时反转录 PCR也和传统的mRNA定量方法如 Northern b lot技术等一样,要求使用参照基因以校正转录效率和 cDNA用量,弥补制备过程中样本纯度和浓度的差别,使不同样本之间目的基因的比较成为可能,以期获得真实可靠的结果。大多数分析方法中这些差别可通过与内参照比较处理消除。最普通的内参照是内源性参照基因,也叫管家基因。管家基因：又称持家基因(house-keeping genes)生物体各类细胞中都表达，其产物是对维持细胞基本生命活动所必需的蛋白质编码的基因。如微管蛋白基因、糖酵解酶系基因与核糖体蛋白基因等。是 为维持细胞基本生命活动所需而时刻都在表达的基因。管家基因表达水平受环境因素影响较小，而是在个体各个生长阶段的大多数、或几乎全部组织中持续表达，或变化很小。它的表达只受启动序列或... 请问我在做荧光定量pcr的时候内参的ct值很低大约在35左右，而目的基因ct值在25左右 有哪位高手能指点一下 你选了个什么内参，表达量如此之低？感觉有点问题，检查一下融解曲线对不对。如果是正确的，说明你的目的基因表达量比内参高出一千倍啊。Ct值越大，表达量越低。