基因工程这一节中，限制性内切酶是只存在于原核细胞吗？基因工程中这个酶是在体外发挥作用吗？ 30多年前，当人们在对噬菌体的宿主特异性的限制-修饰现象进行研究时，首次发现了限制性内切酶。细菌可以抵御新病毒的入侵，而这种\"限制\"病毒生存的办法则可归功于细胞内部可摧毁外源DNA的限制性内切酶。首批被发现的限制性内切酶包括来源于大肠杆菌的EcoR I和EcoR II，以及来源于Heamophilus influenzae的Hind II和Hind III。这些酶可在特定位点切开DNA，产生可体外连接的基因片段。研究者很快发现内切酶是研究限制性内切酶的主要功能是保护细菌不受噬菌体的感染，这一观点已被人们广泛接受。它们作为微生物免疫 机制的一部分行使其功能。当一个没有限制性内切酶的细菌被病毒感染时，大部分病毒颗粒都能成功地进行感染。然而一个有限制性内切酶的同种细菌被成功感染的比率显著下降。出现更多的限制性内切酶将会起到多重保护作用；而一个拥有4到5种各自独立的限制性内切酶将会使细胞坚不可摧。限制性内切酶常常伴随一到两种修饰酶(甲基化酶)出现。后者的作用是保护细胞自身的DNA不被限制性内切酶破坏。修饰酶识别的位点与相应的限制性内切酶相同，但只甲基化每条链中的一个碱基，而不是切开DNA链。限制性内切酶识别位点处的甲基基团伸入到双螺旋 的大沟中去，阻碍了。
限制酶只识别回文序列吗？ 高中水平的限制酶(1)主要来源：原核生物。(2)特点：一种限制酶只能识别一种特定的核苷酸序列，并且能在特定的切点上切割DNA分子，即限制酶具有专一性。限制酶特异性识别的切割部位都具有回文序列。即在切割部位，一条链正向读的碱基顺序，与另一条链反向读的顺序完全一致。(3)在原核细胞中的作用：能将外来的DNA切断，即能够限制异源DNA的侵入并使之失去活力，但对自己的DNA却无损害作用，这样可以保护细胞原有的遗传信息。由于这种切割作用是在DNA分子内部进行的，故名限制性核酸内切酶(简称限制酶)。(4)作用结果：限制酶切割DNA产生的DNA末端有黏性末端和平末端两种形式。当限制酶在它识别序列的中心轴线两侧将DNA的两条链分别切开时，产生的是黏性末端；当限制酶在它识别序列的中心轴线处切开时，产生平末端。(5)限制酶不是一种酶，而是一类酶，迄今已分离得到4000多种限制酶。对限制酶的知识加深 传统上将限制性内切酶按照亚基组成、酶切位置、识别位点、辅助因子等因素划分为三大类。然而，蛋白测序的结果表明，限制性内切酶的变化多种多样，若从分子水平上分类，则应当远远不止这三种。I型限制性内切酶 是一类兼有限制性内切酶和修饰酶活性的多个亚基的蛋白。
