在PCR扩增基因时为什么要用限制性内切酶 真核生物基因外显子中有不能表达为蛋白质的片段.故用限制性内切酶去掉多余部分.
根据基因工程的有关知识，回答下列问题：（1）限制性内切酶切割DNA分子后产生的片段，其末端类型有______ （1）经限制性核酸内切酶切割后能形成两种类型的末端，即平末端和黏性末端．（2）为了便于相连，两种不同限制酶切割之后所产生的黏性末端必须相同．（3）DNA连接酶分为两类：E．coliDNA连接酶和T4DNA连接酶．这二者都能连接黏性末端，此外T4DNA连接酶还可以连接平末端，但连接平末端时的效率比较低．（4）反转录是以mRNA为模板逆转录先合成单链DNA，再合成双链DNA，利用PCR技术进行大量扩增．（5）基因工程常用的运载体：质粒、噬菌体的衍生物、动植物病毒．（6）当受体细胞是细菌时，为了增大导入的成功率，常用Ca2+处理，得到感受态细胞，此时细胞壁和细胞膜的通透性增大，容易吸收重组质粒．未处理的大肠杆菌吸收质粒（外源DNA）的能力极弱．故答案为：（1）黏性末端 平末端（2）切割产生的DNA片段末端与EcoRI切割产生的相同（3）大肠杆菌 T4（4）mRNA（或RNA）cDNA（或DNA）PCR（5）噬菌体 动植物病毒（6）未处理的大肠杆菌吸收质粒（外源DNA）的能力极弱
限制性内切酶有哪些作用？ 不同限制性核酸内切酶识别和切割的特异性不同。DNA在限制性内切核酸酶的作用下，使多聚核苷酸链上磷酸二酯键断开的位置被称为酶切位点（或称为靶序列），可用↓表示。绝大多数的Ⅱ型限制性核酸内切酶，都能识别48个核苷酸组成的特定酶切位点，并且一般是在识别序列内部，如C↓GATCC、AT↓CGAT、GTC↓GAC、CCGC↓CC、AGCGC↓T等。少数限制性内切核酸酶在DNA上的酶切位点在识别序列的两侧，如↓GATC、CATG↓、↓CCAGG等，有些识别序列是连续的（如GATC），有些识别序列是断裂的（如GANTC），但它们共同的特点是具有双重旋转对称的结构形式，即回文结构。Ⅱ型限制性核酸内切酶的靶子位点是多样的，靶序列长度不一样的限e5a48de588b6e799bee5baa6e79fa5e9819331333431353937制酶，对DNA分子的随机切割频率不同。DNA分子经限制性内切核酸酶酶切产生的DNA片段末端，因所用限制性内切核酸酶不同而不同。两条多聚核苷酸链上磷酸二酯键断开的位置如果是交错的，产生的DNA片段末端的一条链多出1至几个核苷酸，这样的末端称为黏性末端。DNA片段末端的3′端比5′端长的称为3′黏性末端，DNA片段5′端比3′端长的称为5′黏性末端。如果两条多聚核苷酸链上磷酸二酯键断开后产生的。
