测定蛋白质含量的方法 缺点 ①凯氏定氮法原理：蛋白质平均含氮量为16%。当样品与浓硫酸共热，蛋白氮转化为铵盐，在强碱性条件下将氨蒸出，用加有指示剂的硼酸吸收，最后用标准酸滴定硼酸，通过标准酸的用量即可求出蛋白质中的含氮量和蛋白质含量。②双缩脲法原理：尿素在180℃下脱氨生成双缩脲，在碱性溶液中双缩脲可与Cu2+形成稳定的紫红色络合物。蛋白质中的肽键实际上就是酰胺键，故多肽、蛋白质等都有双缩脲（biuret）反应，产生蓝色或紫色复合物。比色定蛋白质含量。缺点：灵敏度低，样品必须可溶，在大量糖类共存和含有脯氨酸的肽中显色不好。其 精确度 较差(数mg)，且会受样品中 硫酸铵 及 Tris 的干扰，但 准确度 较高，不受蛋白质的种类影响。③Folin酚法(Lowry)Folin酚法是biuret 法的延伸，所用试剂由试剂甲和乙两部分组成。试剂甲相当于双缩脲试剂（碱性铜试剂），试剂乙中含有磷钼酸和磷钨酸。在碱性条件下，蛋白质中的巯基和酚基等可将Cu2+还原成Cu+，Cu+能定量地与Folin－酚试剂反应生成蓝色物质，600nm比色测定蛋白质含量。灵敏度较高(约 0.1 mg)，但较麻烦，也会受 硫酸铵 及 硫醇化合物 的干扰。步骤中各项试剂的混合，要特别注意均匀澈底，否则会有大误差。④紫外法280nm光吸收法。
测定蛋白质含量的方法有哪些，其原理各是什么. Bradford法测定蛋白质浓度（一）实验原理双缩脲法（Biuret法）和Folin—酚试剂法（Lowry法）的明显缺点和许多限制，促使科学家们去寻找更好的蛋白质溶液测定的方法.1976年由Bradford建立的考马斯亮兰法（Bradford法），是根据蛋白质与染料相结合的原理设计的.这种蛋白质测定法具有超过其他几种方法的突出优点，因而正在得到广泛的应用.这一方法是目前灵敏度最高的蛋白质测定法.考马斯亮兰G-250染料，在酸性溶液中与蛋白质结合，使染料的最大吸收峰的位置（？max），由465nm变为595nm，溶液的颜色也由棕黑色变为兰色.在595nm下测定的吸光度值A595，与蛋白质浓度成正比.Bradford法的突出优点是：（1）灵敏度高，据估计比Lowry法约高四倍，其最低蛋白质检测量可达1？g.这是因为蛋白质与染料结合后产生的颜色变化很大，蛋白质－染料复合物有更高的消光系数，因而光吸收值随蛋白质浓度的变化比Lowry法要大的多.（2）测定快速、简便，只需加一种试剂.完成一个样品的测定，只需要5分钟左右.由于染料与蛋白质结合的大约只要2分钟即可完成，其颜色可以在1小时内保持稳定，且在5分钟至20分钟之间，颜色的稳定性最好.因而完全不用像Lowry法那样费时和严格地控制时间.（3）干扰物质少.如。
常用来测定蛋白质含量的方法有哪些？优缺点是什么？ 1、凯氏定氮法 凯氏定氮法是测定化合物或混合物中总氮量的一种方法。即在有催化剂的条件下，用浓硫酸消化样品将有机氮都转变成无机铵盐，然后在碱性条件下将铵盐转化为氨，。
如何选择合适的蛋白含量测定方法 选择一种蛋白测定方法时，需要考虑两个重要因素：缓冲液的化学组成和检测的蛋白量。基于dford方法的Quick Start Bradford和Bio–Rad 蛋白测定灵敏度高，可以兼容糖、巯基乙醇、DTT等。而对于去污剂和NaOH这两种干扰Bradford测定的物质，DC蛋白测定却可以兼容。如果蛋白是在loading buffer中，准备跑1D或2D电泳，或者刚从细胞裂解液中抽提出来，需要定量，那么RC DC蛋白测定更合适。向左转|向右转扩展资料：常见测试方法：Quick Start Bradford 蛋白测定是一种简单、精确的蛋白浓度定量方法。现成的1倍浓度染料和7 个预稀释浓度(0.125、0.25、0.5、0.75、1.0、1.5、2.0 mg/ml)的蛋白标准品，让你拥有现成的检测工具。无需稀释标准品和染料，一步完成蛋白浓度定量。Bio–Rad 蛋白测定 也是一种简单的蛋白浓度测定方法。该方法适应标准浓度测定、低浓度微量测定，或96孔微孔板的快速测定。它的基本原理和流程和上面的Quick Start Bradford都是一样的，不过要麻烦一点点。因为除了要稀释蛋白标准品，配成几个不同浓度之外，还要稀释染料，再过滤除去不溶颗粒。Quick Start Bradford 和Bio–Rad 蛋白测定方法的起源都是Bradford染料结合方法(Bradford 1976)，该方法检测。
蛋白质含量测定药典规定必须用什么方法 蛋白质含量测定根据我国药典的规定，不同品种应针对自身蛋白质特性选择适宜的测定方法并做相应方法学验证，同时应尽可能选用与待测品种蛋白质结构相同或相近的蛋白质作对照品。第一法 凯氏定氮法第二法 福林酚法(lowry)第三法 双缩脲法第四法 联喹啉-二羧酸法(BCA)第五法 考马斯亮蓝法(Bradford)第六法 紫外分光光度法
国家标准检测蛋白质含量测定方法 ①凯氏定氮法：将蛋白质转化为氨，用酸吸收后滴定②双缩尿法：灵敏度低，多肽键+碱性Cu2+紫色络合物，不同蛋白质的显色相似③紫外吸收法比较灵敏，蛋白质的中的络氨酸和色氨酸残基在280nm出的光吸收④Folin-酚试几法（lowry法）：灵敏度高，磷钼酸-磷钨酸试剂被tyr和phe还原，不同蛋白质不同的颜色深浅变化不同⑤考马斯亮蓝法（bradford法）：在酸性溶液中考马斯亮蓝染料与蛋白质结合使燃料最大吸收峰位置由465nm变为595nm，溶液颜色由棕黑变为蓝色
蛋白质含量测定药典规定必须用什么方法 使用凯氏定氮的方法检测蛋白质含量。凯氏定氮法 凯氏定氮法蛋白质测定的国标规定方法—凯氏定氮法介绍【GB/T 5009.5—1985】食品中蛋白质的测定方法本标准适用于各类食品中蛋白质的测定。1 原理蛋白质是含氮的有机化合物。食品与硫酸和催化剂一同加热消化，使蛋白质分解，分解的氨与硫酸结合生成硫酸铵。然后碱化蒸馏使氨游离，用硼酸吸收后再以硫酸或盐酸标准溶液滴定，根据酸的消耗量乘以换算系数，即为蛋白质含量。2 试剂所有试剂均用不含氨的蒸馏水配制。2.1 硫酸铜。2.2 硫酸钾。2.3 硫酸。2.4 2%硼酸溶液。2.5 混合指示液：1份0.1%甲基红乙醇溶液与5份0.1%溴甲酚绿乙醇溶液临用时混合。也可用2份0.1%甲基红乙醇溶液与1份0.1%次甲基蓝乙醇溶液临用时混合。2.6 40%氢氧化钠溶液。2.7 0.05N硫酸标准溶液或0.05N盐酸标准溶液。3 仪器定氮蒸馏装置：如图所示。（图略）4 操作方法4.1 样品处理：精密称取0.2～2.0g固体样品或2～5g半固体样品或吸取10～20ml液体样品(约相当氮30～40mg)，移入干燥的 100ml或500ml定氮瓶中，加入0.2g硫酸铜，3g硫酸钾及20ml硫酸，稍摇匀后于瓶口放一小漏斗，将瓶以45°角斜支于有小孔的石棉网上。小心加热，待内容物全部炭化，泡沫完全。
测定蛋白质含量的方法有哪些
测定蛋白质含量的方法有哪些，其原理各是什么？ 蛋白质含量测定法，是生物化学研究中最常用、最基本的分析方法之一。目前常用的有四种古老的经典方法，即定氮法，双缩尿法（Biuret法）、Folin－酚试剂法（Lowry法）和紫外吸收法。另外还有一种近十年才普遍使用起来的新的测定法，即考马斯亮蓝法（Bradford法）。其中Bradford法和Lowry法灵敏度最高，比紫外吸收法灵敏10～20倍，比Biuret法灵敏100倍以上。定氮法虽然比较复杂，但较准确，往往以定氮法测定的蛋白质作为其他方法的标准蛋白质。值得注意的是，这后四种方法并不能在任何条件下适用于任何形式的蛋白质，因为一种蛋白质溶液用这四种方法测定，有可能得出四种不同的结果。每种测定法都不是完美无缺的，都有其优缺点。在选择方法时应考虑：①实验对测定所要求的灵敏度和精确度；②蛋白质的性质；③溶液中存在的干扰物质；④测定所要花费的时间。考马斯亮蓝法（Bradford法），由于其突出的优点，正得到越来越广泛的应用。
国家标准检测蛋白质含量测定方法 蛋白质含量测定方法就是检测N元素的含量，像三聚氰胺的问题，就是通过增加N的含量使“蛋白质”含量提高的。国家标准检测蛋白质含量的方法叫做凯氏定氮法，食物中的蛋白质在催化加热条件下分解，导致氨和硫酸结合产生硫酸铵。碱蒸馏采用无硫，硼酸吸收，用硫酸或盐酸标准滴定溶液滴定，根据酸耗计算氮含量，再乘以转化系数，即蛋白质含量。具体操作步骤如下：1.样品处理精确称量0.2-2.0g固体样品或2-5g半固体样品或吸收10-20ml液体样品（约30-40mg氮当量）。将其转移至干燥的100毫升或500毫升氮气固定瓶中，加入0.2克硫酸铜，6克硫酸钾和20毫升硫酸，轻轻摇动，在瓶口放置一个小漏斗，将瓶子倾斜石棉网上有45度角，有小孔。加热小火后，内容物碳化，泡沫完全停止，加强火力，保持瓶内液体稍微沸腾，直至液体呈蓝绿色澄清透明，然后继续加热0.5小时。取出并冷却，小心加入20毫升水，冷却，移入100毫升容量瓶中，用少量水洗净氮气瓶，洗净液放入容量瓶中，然后用水冲洗至刻度，混匀备用。取相同量的硫酸铜，硫酸钾和浓硫酸作为试剂进行空白试验。然而，这种方法很危险，很难在实验室中证明。大多数实验室都有一个消化器，可以一次处理16个以上的样品和一个可以自行。
