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用于去掉植物细胞壁的纤维素酶和果胶酶的选用. 原生质体保持活性 培养

2020-10-05知识6

组织培养有什么优点和缺点? 优点:1、繁殖速度快、繁殖系数大:用试管快繁技术繁殖,可节约繁殖材料,只取原材料上的一小块组织或器官就能在短期内生产出大量市场所需的优质苗木,每年可以繁殖出几万。

怎样对原生质体的活力检验 原生质体(protoplast)是去除细胞壁,由质膜包裹的裸露细胞。由于原生质体失去了细胞壁这一屏障,因而使其具有特殊的优点,可作来为一个单细胞系统用于细胞壁再生、膜的透性及离子转运、细胞分裂与分化、细胞器摄入、病毒侵染机理等基础理论的研究。纯化的原生质体需经活力测定后方可用于培养。活力测定的方法有:1、根据形态待征判断其活力:原生质体呈绿色(若来源于叶片)及圆而鼓者为活原生质体。2、荧光染料活体染色法:荧光素染料可自自由透过细胞膜,在细胞内被酯酶水解为荧光素,后者zhidao不能自由透过细胞膜而滞留于细胞内,在荧光显微镜下根据荧光强度即可判断原生质体死活。3、酚藏花红染色法:活原生质体能吸收呈红色,无活性的则不能吸收而无色。

原生质体可不可以在光照条件下培养 原生质体(protoplast):脱去细胞壁的细胞叫原生质体,是一生物工程学的概念.动物细胞也可算做原生质体.革兰氏阳性菌经溶菌酶或青霉素(也可用果胶酶以及纤维素酶)处理后,可除去细胞壁,形成仅由细胞膜包住细胞质的菌体.植物细胞用果胶酶以及纤维素酶处理后,可除去细胞壁,形成仅由细胞膜包住细胞质的体系.动物细胞就相当于原生质体(但与原生质体有一定区别).原生质体由原生质分化形成,具体包括细胞膜和膜内细胞质及其他具有生命活性的细胞器.植物和动物的如细胞核、线粒体和高尔基体等,而细菌如核糖体、拟核等.

下列有关克隆技术的叙述正确的有(  )

原生质体的固液结合培养法是怎样做的?

此方法首先要获得去细胞壁的原生质体,可用胞壁降解酶除去芽管或菌丝的细胞壁。通常使用的是酶混合物,例如纤维素酶、蜗牛酶、溶壁酶等,这些胞壁降解酶混合使用通常会更好地发挥去壁作用,在原生质体准备过程中,要求渗透压稳定剂。1987年Penttila等第一次在里氏木霉(Trichoderma reesei)原生质体制备基础上利用PEG介导实现木霉的转化,以后的其他研究者的木霉PEG转化大多是在他的基础上进行改良而来,在原生质制备过程中成功使用山梨醇保持渗透压稳定,浓度为1.2M,MgSO4可以作为替代品。此外,有些真菌使用甘露醇或NaCl也是可行的(Fincham et al.,1989)。T.reesei使用1.0~1.2M的山梨醇可有效控制渗透压稳定性,后代再生率为90%。经过PEG转化,原生质体再生率从90%降至12%~35%。PEG转化技术的主要优势在于尽管不同物种的原生质体形成和传代是非常多样的,但该方法均可适用。一般来说,原生质体储存越久,转化效果越差(Penttila et al.,1987b),所以原生质体需要现用现制备。此外,原生质体常常不止一个细胞核,这需要做长时间净化处理以得到同核体。PEG介导的原生质体转化法是通过PEG的介导作用将遗传因子转入受体细胞原生质体中的一种方法,原生质体的制备与再生。

B.原生质体是有代谢活性的原生质部分,包括质膜和细胞质

#细菌细胞壁#原生质#果胶酶#纤维素酶

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