把目的基因连接到质粒上构建重组质粒时该如何选择限制性内切酶？引物如何设计？
如何在目的基因的两侧接上限制性核酸内切酶酶切位点？
请问：基因工程中用两种限制性内切酶切割如何避免出现质粒与质粒、目的基因与目的基因连接。请解释 两种限制性内切酶切割，切割后形成的黏性末端不同，避免了由于相同的黏性末端碱基互补配对而出现质粒与质粒、目的基因与目的基因连接。因为用DNA连接酶连接时，除了缝合磷酸二酯键外，还要依靠相互间的碱基互补配对。
怎样寻找限制性内切酶位点？怎样插入目的基因？ 通过一些软件就可以知道你的序列上的酶切位点情况。通过选择目的基因上没有而载体有的酶切位点就可以把目的基因连接到载体上。
请问：基因工程中用两种限制性内切酶切割如何避免出现质粒与质粒、目的基因与目的基因连接。请解释 “两条目的基因的1处粘性末端不也可以链接吗？当然存在这种可能性。但用两种限制性内切酶切割最主要的目的是防止载体切割后的自连，几率不但大，而且可以产生克隆，大量的自连会影响挑选重组的克隆。
用反转录法合成目的基因时，必须有 D
